黄芪多糖联合顺铂对人肺腺癌A549细胞增殖的抑制作用及对Bax、Bcl-2、Caspase-3的影响

目的:以人肺腺癌A549细胞为研究对象,探讨黄芪多糖与顺铂对该细胞的增殖抑制、周期调控、诱导凋亡的影响,并对两药联合作用的机制进行了初步的研究,从而为非小细胞肺癌的化疗提供新的思路,为以后临床应用提供理论依据。方法:体外培养人肺腺癌A549细胞,取处于对数生长期的细胞进行实验,实验分四组:阴性对照组;黄芪多糖组;顺铂组;黄芪多糖+顺铂组。MTT法检测黄芪多糖、顺铂及两药联合对细胞的增殖影响,并用Q值公式评估两药联合的作用效果;流式细胞术检测药物对细胞周期及凋亡率的影响;RT-PCR技术检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3的m RNA表达水平;Western blot检测Bax、Bcl-2、Caspase-3的蛋白表达变化。结果:1、黄芪多糖、顺铂对人肺腺癌A549细胞增殖呈时间-浓度依赖抑制作用;联合用药的增殖抑制作用优于单一用药,两药联合作用表现为单纯相加。2、流式细胞术检测处理48h的A549细胞,黄芪多糖作用后可出现G1期细胞阻滞(P<0.01);顺铂作用后出现S期细胞阻滞(P<0.01);两药物联用将细胞阻滞于G1和S期(P<0.01)。黄芪多糖、顺铂均能诱导A549细胞凋亡,且同一作用时间两者联合的凋亡率高于单一用药(P<0.01)。3、黄芪多糖、顺铂均可促进人肺癌A549细胞Bax、Caspase-3 m RNA表达和抑制Bcl-2 m RNA表达,差异均有统计学意义(P<0.01)。与单一用药组比较,黄芪多糖及顺铂联合作用效果更强,差异均有统计学意义(P<0.01)。4、与阴性对照组比较,黄芪多糖、顺铂均可明显促进人肺癌A549细胞Bax、Caspase-3蛋白表达,而抑制Bcl-2蛋白表达;与单一药物组及阴性对照组比较,黄芪多糖与顺铂联合作用效果更强,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:黄芪多糖、顺铂具有抑制人肺腺癌A549细胞增殖及促进细胞凋亡的作用,两药联合效果明显增强。黄芪多糖协同顺铂促人肺腺癌A549细胞凋亡,其作用机制可能与下调Bcl-2表达、上调Bax表达、增强Caspase-3表达有关。