腹泻型肠易激综合征患者结肠异常表达蛋白质的筛选及鉴定

[背景与目的] 肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)是常见的功能性肠病,其发病机制尚不清楚。已提出的有胃肠动力异常机制,内脏敏感性改变机制,脑肠相互作用机制,肠道内分泌细胞异常机制等等,但是所有的这些机制均不能解释IBS的全部表现。本研究着眼于一切生命活动的直接执行体——蛋白质的改变,旨在从蛋白质水平发现腹泻型IBS(D-IBS)患者结肠发生的异常改变,揭示IBS出现各种临床症状的可能原因。 [材料与方法] D-IBS患者4例,诊断均符合功能性胃肠病罗马Ⅱ诊断标准,男女各半作为实验组,健康志愿者4例作为对照组。分别在进行结肠镜检查时,直视下于回肓部及乙状结肠处活检3块,立即置于含0.1%苯甲基磺酰氟(PMSF)的冰盐水中洗净,液氮中保存。(离体后10分钟内完成)。提取标本蛋白后,按照G(?)rg A的方法进行双向凝胶电泳。一向等电聚焦,按照等电点的不同将蛋白提取液在水平方向进行一维分离,二向十二烷基磺酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对蛋白提取液按照分子量不同在垂直于等电聚焦方向上进行第二维分离。采用考马斯亮蓝染色法对于凝胶进行显色固定,扫描仪获取图像。使用Image Master 2D Elite软件对图像进行分析配比,筛选出在D-IBS组表达有明显差异的蛋白质点;选取差异最明显而且与其它蛋白点易于分离的点进行质谱鉴定,鉴定出的蛋白在专业网站检索其功能。 [结果] 利用双向电泳技术成功得到人结肠粘膜组织的蛋白质组图谱,正常对照组2-DE图谱得到平均蛋白点336个,组间图像平均匹配率91.83%,D-IBS组2-DE图谱得到平均蛋白点426个,组间图像平均匹配率94.60%。D-IBS组与正常对照组之间平均胶进行比较,两组间匹配率为74%,