雨生红球藻中虾青素的分离纯化及异构体的分析研究

由于中草药在治疗疑难病症显示出独特的作用,人们迫切需要建立一种快速有效的分离技术,对天然产物或药物的有效成分进行分离和鉴定。但是,由于药物分子同分异构体的理化性质极其相似,对有效成分异构体的分离和分析研究很困难。因此,利用高效液相色谱法对虾青素的异构体进行分离和分析,是一项十分有意义的研究工作。 本文的主要工作如下: 1、本文以二氯甲烷与甲醇为溶剂,反复浸泡雨生红球藻,对浸泡液皂化处理(皂化液为5% KOH-CH3OH)后,再经薄层层析,柱层析,重结晶等分离纯化处理,获得了虾青素的纯品。 2、分别采用超声波破碎法,冷冻破碎法,研磨破碎法对新鲜雨生红球藻的破壁工艺进行了探讨。结果表明,超声波破碎法适用于雨生红球藻的细胞破壁,此法的最佳条件:超声波功率315 W,破壁时间20 min。以丙酮为空白样,采用分光光度法,测定出雨生红球藻中虾青素的含量可达到0.98%。 3、利用高效液相色谱法对虾青素纯品的异构体进行了分析。分别从色谱柱,洗脱方式与流动相的选取,流动相配比与流速的确定,柱温的选择等几个方面对虾青素异构体分离的色谱条件进行了优化。优化后的色谱条件:C30色谱柱(5μm,4.6×250 mm),二氯甲烷和乙腈(1:1)为流动相,等度洗脱,检测波长487 nm,柱温35℃,流速1 mL/min。 4、选用液质联用方法对虾青素的异构体进行了鉴定。液质联用的条件:Kromasil C18色谱柱(4.6μm,4.6×50 mm),流动相为含有0.05%甲酸的乙腈和水(9:1),等度洗脱,检测波长487 nm,柱温35℃,流速1 mL/min。采用正离子或者负离子扫描方式,电喷雾质谱离子源(ESI)检测了虾青素三个异构体的峰。液质联用仪检测结果表明,从雨生红球藻中纯化出的虾青素纯品,含有三种异构体。