六月青多糖的分离纯化及其抗肝损伤作用的研究

目的:探讨六月青各个流分体外清除自由基以及抗氧化的作用。方法:将六月青60%乙醇提取物上AB-8大孔树脂柱,依次用蒸馏水、10%乙醇、30%乙醇、50%乙醇和70%乙醇洗脱,收集各个洗脱流分,减压浓缩并冷冻干燥,得到流分AE。采用改良邻苯三酚自氧化法和邻二氮菲-Fe2+/H2O2体系研究流分AE对自由基的作用。采用硫代巴比妥酸法测小鼠肝中丙二醛（MDA）含量,分光光度法测小鼠红细胞溶血和肝线粒体肿胀度,并研究水洗脱流分对它们的影响。采用化学法鉴定水洗脱流分的主要成分。结果:六月青水洗脱流分能抑制·OH和O2·-的生成,可有效抑制MDA的产生,减少小鼠红细胞溶血,减轻肝线粒体肿胀度;其主要成分为多糖类物质。结论:六月青多糖有明显的体外抗氧化作用。 目的:提取、纯化六月青多糖,并测定其半数致死量,为进一步研究六月青多糖的药理作用提供依据。方法:采用水提醇沉法提取六月青粗多糖,用Sevag法除蛋白,H2O2法去色素,纯化六月青多糖。以葡萄糖为标准品,苯酚-浓硫酸法测定六月青多糖的含量。采用Bliss法测定六月青多糖的半数致死量。结果:纯化后的六月青多糖的含量为71.80%（含量以葡萄糖计算）,通过Bliss法测得六月青多糖的半数致死量为21.8g多糖/kg,95%可信区间为18.3-26.1g多糖/kg。结论:通过本实验的分离纯化,所得到的六月青多糖纯度较高,达71.8%,其半数致死量较大,为21.8g多糖/kg,毒性较低,可以进一步的研究。 目的:研究六月青多糖对四氯化碳（CCl4）所致小鼠急性肝损伤的保护作用并探讨其作用机制。方法:昆明种小鼠随机分为正常对照组（NC组）、模型组（CCl4 model组）、阳性药组（BPDC组）、六月青多糖高剂量（LYQPSH）、中剂量（LYQPSM）、低剂量（LYQPSL）组。连续给药7d,末次给药1h后,除正常对照组外,其余各组腹腔注射0.2%CCl4花生油溶液建立小鼠急性肝损伤模型。20h后取血,测定各组小鼠的肝脏指数、脾脏指数和胸腺指数;检测各组小鼠血清中谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（AKP）和血清白蛋白（Alb）含量,总抗氧化能力（T-AOC）;肝组织丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性;HE染色观察各组小鼠肝细胞损伤程度。结果:与模型组比较,LYQPS各剂量组能降低肝脏指数和脾脏指数,但对胸腺指数无明显影响;可降低血清ALT、AST、AKP和肝组织MDA含量;提高血清Alb、T-AOC水平和肝组织SOD活性（P<0.05或0.01）;病理切片结果表明LYQPS各组能够不同程度地减轻肝细胞的损伤程度。结论:LYQPS对四氯化碳致小鼠化学性肝损伤具有明显的保护作用,其机制可能与其抗氧自由基、抑制脂质过氧化作用有关。 目的:研究六月青多糖对刀豆蛋白A（Con A）所致小鼠急性肝损伤的保护作用并探讨其作用机制。方法:90只小鼠于实验首日上午尾i.v. Con A（20mg/kg）,并随机分为模型组（Con A组）、阳性药组（BPDC组）、六月青多糖高剂量（LYQPSH组）、中（LYQPSM组）、低（LYQPSL组）组。另取18只小鼠作为正常对照组。次尾i.v. Con A 8h后给予相应受试药,连续3d。末次给药4h后,除正常对照组外,各组小鼠再次尾i.v. Con A（20mg/kg）,2h后每组处死8只小鼠,摘眼球取血,检测血清TNF-α含量。其余各组小鼠在尾i.v. Con A 8h后摘眼球取血,检测各组小鼠血清中谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（AKP）活性,肝微粒体一氧化氮（NO）含量;肝组织丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性;免疫组织化学法观察肝组织Fas及FasL的表达;HE染色观察各组小鼠肝细胞损伤程度。结果:与模型组比较,LYQPS各剂量组能显著降低血清ALT、AST、AKP活性,降低肝微粒体NO含量以及肝组织MDA含量;增强肝组织SOD活性（P<0.05或P<0.01）;病理切片结果表明LYQPS各组能够不同程度地减轻肝细胞的损伤。免疫组化结果表明LYQPS各剂量组可不同程度地下调Fas及FasL的表达。结论:LYQPS对Con A致小鼠免疫性肝损伤具有明显的保护作用,其机制可能与下调TNF-α和NO浓度,抗细胞凋亡,抑制脂质过氧化有关。