炎症因子IL-7R在膝关节骨性关节炎滑膜中的表达及意义

骨性关节炎(osteoarthritis OA)是骨科比较常见的疾病,也是一种危害老年人健康的慢性进行性骨关节病。膝关节骨性关节炎的病理变化主要是软骨合成与分解代谢平衡失调引起的关节软骨的变性和破坏。目前对膝关节骨性关节炎还没有很满意的治疗方法,早期采用非手术治疗,晚期软骨破坏严重,此时采用手术治疗,而目前对骨与关节疾病的基因治疗,正成为世界关注的热点。在淋巴细胞增殖和淋巴细胞分化中白介素-7受体起到了关键作用,B系淋巴细胞和T系淋巴细胞生成障碍主要是因为细胞的表面缺乏白介素-7受体,而重症联合免疫缺陷病是因为缺乏T细胞,T细胞的缺乏主要是由于IL-7R α或c存在缺陷。还有研究证实在区分是记忆性T细胞和调节性T细胞方面,白介素-7受体也发挥着作用,广大研究者们越来越关注白介素-7受体主要是因为它具有分化淋巴细胞的作用而且还有机体免疫记忆的作用。目前国内、外关于同类文献尚少见,因此,我们运用基因芯片,组织苏木素-伊红染色法,免疫组化,RT-PCR实验方法检测IL-7R基因在膝关节骨性关节炎滑膜中的表达情况。 [目的] 探讨膝关节骨性关节炎滑膜中IL-R基因在膝关节骨性关节炎中发生与发展过程中的表达作用及表达异常。 [方法] 1.收集64例筛选来自延边大学附属医院骨科患者新鲜滑膜组织,其中25例为半月板损伤及交叉韧带损伤行关节镜手术治疗患者的正常新鲜滑膜组织,39例为符合OA诊断标准,行膝关节人工关节置换术患者的新鲜滑膜组织,组织离体后放入无菌管,直接置于液氮中,30分钟后转入-80℃冰箱保存。2.收集的滑膜组织中取3例正常新鲜滑膜组织与10例OA新鲜滑膜组织,保存到液氮中送到北京市博奥生物有限公司进行基因芯片检测。3.为证实基因芯片结果进一步行Real time RT-PCR检测。4.膝关节滑膜组织必须放在百分之四的多聚甲醛溶液中,并且要在四摄氏度的温度下固定二十四个小时,然后脱水和石蜡包埋。最后要把所有的标本按照4um的规格,使用切片机切片两张,载玻片上固定。5.固定在载玻片上,留在HE染色实验和免疫组化实验中使用。特别注意的事在进行免疫组织化学实验时,所使用的切片要过夜必须放在六十摄氏度的温箱中。6.采用Trizol法提取滑膜组织中的总RNA,采用Applied Biosystems逆转录试剂盒逆转录合成第一链cDNA,经PCR反应扩增IL-7R基因片段,进行逆转录聚合酶链反应。检测54例膝关节髌上囊滑膜组织中IL-7R表达与膝关节骨性关节炎中IL-7R基因的表达意义。 [结果] 1.mRNA基因芯片检测结果示：IL-7R在正常膝关节滑膜组织与膝关节骨性关节炎滑膜组织中相比膝关节骨性关节炎滑膜组织中表达明显下降。2. real time RT-PCR检测结果示：IL-7R基因表达在膝关节OA滑膜组织中明显降低。3.HE染色结果示：发生炎症和退行病变的滑膜组织中,滑膜细胞形态学发生改变,并有炎症细胞浸润,并伴有结缔组织增生,肥厚。4.免疫组织化学法结果示：IL-7R在滑膜细胞胞浆中表达,膝关节骨性关节炎滑膜中发生炎症后,IL-7R的表达下降。5. RT-PCR实验结果示：膝关节OA滑膜中工L-7R与正常膝关节滑膜组织中相比明显降低。 [结论] (1)膝关节骨性关节炎疾病的整个过程中,膝关节骨性关节炎患者的滑膜组织均表现着明显的炎症反应性增生。 (2)本研究发现IL-7R在膝关节骨性关节炎滑膜细胞中的表达下降。 (3)IL-7R在膝关节骨性关节炎滑膜组织中表达明显降低,IL-7R在膝关节骨性关节炎的病理过程中发挥重要作用。 (4)把IL-7R作为早期诊断和治疗膝关节骨性关节炎疾病的靶点之一,为在临床治疗膝关节骨性关节炎提供了一条新途径。