急性百草枯中毒肺损伤小鼠模型建立及补体在其发病中的作用研究

实验目的：通过建立急性百草枯(paraquat，PQ)中毒肺损伤小鼠模型，初步研究补体系统在急性百草枯中毒肺损伤中的作用。 方法：(1)实验一：以不同剂量PQ(10mg／kg、20mg／kg和50mg／kg)染毒BALB／c小鼠，48小时后采集小鼠肺泡灌洗液(BALF)、肺组织标本，以Bradford法测BALF中总蛋白浓度，测定肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性以及肺组织病理学分析，研究不同剂量急性百草枯中毒小鼠肺损伤情况；(2)实验二：采用20mg／kgPQ染毒小鼠，于染毒后0h、4h、12h、24h、48h留取肺泡灌洗液、肺组织标本，同样观察上述指标，研究百草枯中毒小鼠不同时间点急性肺损伤特点；同时收集小鼠血清，采用免疫比浊法检测血清C3c水平，免疫组织化学技术检测肺组织中C3、C5a和C1q沉积和分布，研究染毒后小鼠体内补体激活情况以及与肺组织损伤之间的相互关系；(3)实验三：选用PQ染毒剂量10mg／kg、20mg／kg，分别在染毒前48h、36h、24h腹腔内注射眼镜蛇毒因子(CVF)2.5μg耗竭小鼠体内补体，染毒后48h留取肺泡灌洗液、肺组织，与未注射CVF以相同剂量PQ染毒小鼠比较BALF总蛋白浓度、MPO活性、组织病理学以及存活率差异，进一步研究补体在百草枯中毒小鼠急性肺损伤中的作用。 结果：(1)小鼠肺组织MPO活性、BALF总蛋白浓度及肺组织病理学比较结果提示随PQ染毒剂量加大和病程的延长，肺组织损伤逐渐加重；(2)本研究显示20mg／kgPQ染毒小鼠血清C3c水平在染毒后12h升高，24h达到高峰，持续至48h；免疫组化显示染毒后4h C3在肺血管内皮、细支气管上皮及间质均有沉积，着色重，12小时开始小鼠肺组织C3沉积减少，着色变淡；C5a、C1q自染毒后4h开始在肺血管内皮、细支气管上皮基底膜及间质均有沉积，且随病程延长，着色逐渐加重；(3)CVF耗竭补体后染毒小鼠肺组织损伤减轻，炎性细胞浸润减少，存活时间延长。10mg／kg单纯染毒小鼠5天存活率20％，补体耗竭后染毒组小鼠长期存活；20mg／kg组存活率由3天0％提高到70％。 结论：(1)成功建立了急性百草枯中毒肺损伤小鼠模型；(2)研究表明其肺组织损伤严重程度具有剂量和时间相关性，PQ染毒剂量加大，病程延长，急性百草枯中毒肺损伤程度逐渐加重；(3)在小鼠百草枯中毒急性肺损伤早期，补体即被激活，并在PQ中毒小鼠急性肺损伤中发挥重要作用。