鹿茸中促细胞增殖的有效部位的研究及其主成分分析

鹿茸为鹿科动物梅花鹿Cervus nippon Temminck或马鹿Cervus elaphus Linnaeus的雄鹿未骨化密生茸毛的幼角,能进行周期性更换[1]。前者习称“花鹿茸”,后者习称“马鹿茸”。性甘、咸,温。归肾、肝经。夏、秋二季锯取鹿茸,经加工后,阴干或烘干。具有壮肾阳,益精血,强筋骨,调冲任,托疮毒等作用。用于腰脊冷痛,筋骨痿软,肾阳不足,精血亏虚,阳痿滑精,宫冷不孕,赢瘦,神疲,畏寒,眩晕,耳鸣,耳聋,崩漏带下,阴疽不敛[2]。本文采用DPPH、ABTS、还原力三种测定方法对驯鹿鹿茸和梅花鹿鹿茸各部位提取物体外抗氧化活性进行了测定。结果显示,驯鹿鹿茸和梅花鹿鹿茸各部位提取物均具有抗氧化活性,且其水提物的的抗氧化活性均高于醇提物的抗氧化活性,且随着浓度的增长其抗氧化活性也随之提高,具有浓度依赖性。实验表明,驯鹿鹿茸提取物和梅花鹿鹿茸各部位提取物具有较好的体外抗氧化活性,为鹿茸的进一步开发与利用提供了一定的理论依据。由此提示,鹿茸作为一种天然的抗氧化剂,其与抗氧化活性相关的潜在的药理作用有待于进一步的研究与证实。本文通过研究驯鹿鹿茸的不同有效部位对人肾成纤维细胞的增殖作用的影响,为鹿茸在治疗肾损伤方面提供依据。用MTT法测定鹿茸的乙醚、氯仿、乙酸乙酯、乙醇、水的提取物对人肾成纤维细胞增殖的影响。鹿茸不同浓度水提物在3-9天时促细胞增殖效果极显著。水提物浓度为10μg/mL、100μg/mL时在第7天增殖效果明显(P﹤0.01),增值率分别为116.5%、172%;水提物1mg/mL在第5天达到增殖最高峰(P﹤0.01),增值率为276.3%。乙醇提取物浓度为1mg/mL时在7-9天促进人肾成纤维细胞增殖(P﹤0.05),在第七天增值率最大为31%。结果说明鹿茸的补肾壮阳功效是通过显著提高人肾成纤维细胞活性实现的。本文建立顺铂导人胚肾细胞(HEK293)细胞损伤模型,通过MTT和LDH测定,比较不同浓度的驯鹿鹿茸提取物(水提物,醇提物,乙醚提取物,氯仿提取物,乙酸乙酯提取物)诱导HEK293细胞损伤的保护作用。体外培养HEK293,观察鹿茸提取物对CDDP诱导HEK293细胞生长的影响,并用MTT法和LDH法检测鹿茸对CDDP诱导HEK293细胞死亡率的变化。结果显示鹿茸提取物能够拮抗CDDP诱发的细胞损伤,具有浓度依赖性,其半数致死浓度为0.083±0.03mmol L-1。当HEK293细胞与不同浓度鹿茸提取物,共同孵育24 h,分别加入CDDP后,检测表明鹿茸水提物较其他溶剂提取物对顺铂诱导损伤的HEK293有交好的保护作用,其浓度在1mg/mL时对顺铂诱导损伤的HEK293细胞的保护作用最强,细胞存活率达到62%(P<0.01)。鹿茸水提物对CDDP诱导人胚肾细胞损伤的抑制作用最强,可有效保护细胞活性,抑制肾损伤。本文研究梅花鹿鹿茸提取物对顺铂(CDDP)所致人胚肾细胞(HEK293)损伤的影响,并探讨其可能机理。体外培养HEK293,观察鹿茸提取物对CDDP诱导HEK293细胞生长的影响,并用MTT法和LDH法检测鹿茸对CDDP诱导HEK293细胞凋亡率的变化:分别用SOD、MDA试剂盒检测鹿茸提取物对CDDP诱导HEK293细胞损伤的影响。结果显示鹿茸提取物能够拮抗CDDP导致的细胞毒性,并且随着浓度的不同而产生变化。检测表明随着鹿茸蛋白和多糖质量浓度的增加,细胞损伤率随之减少;SOD、MDA检测表明,加入鹿茸提取物后能够使顺铂模型组细胞培养液中的超氧化物歧化酶含量增高,丙二醛含量降低。鹿茸蛋白对CDDP诱导人胚肾细胞损伤的抑制作用最强,其作用机理可能与细胞培养液中的MDA、SOD含量有关。本文通过采用主成份分析法研究表明不同鹿茸样品中化学成分对差异性。碎石图6.1显示因子1与因子2之间的特征值之差比较大,而其他因子间的特征值之差相比较小,因子1和因子2的方差贡献率分别为57.128%和21.59%,显著的拐点是2,但因子1累计贡献率为57.128,小于70%,因子2的累积贡献率为78.718%,因子3的累积贡献率为93.792%。主成份分析结果表明,鹿茸粗蛋白、水分、水浸提物是鹿茸的特征性成分,而其余成分均不是鹿茸的特征性成分,不能明显的表达各鹿茸之间的差异。主成分分析法表明不同鹿茸在9种营养成分上的相似性和差异性,为评价鹿茸的品质特征研究提供了理论依据。