针灸可有效地缓解急慢性疼痛,针刺治疗急性疼痛可产生良好的即时效应,要巩固疗效,需要多次的治疗;对于慢性疼痛,需要更多次的重复治疗才可收到明显的效果。因此,弄清针刺产生累积效应的机制,对于进一步提高临床疗效,具有重要意义。
我们前期工作结果表明:电针镇痛累积效应出现时,大鼠的下丘脑,海马内囊泡乙酰转移酶(VAChT)、胆碱乙酰转移酶(CHAT)、蛋白激酶PKA、PKC活性明显上调,去卵巢后,雌激素的水平降低,电针对这些蛋白的表达调节的作用明显减弱。本实验从神经记忆的角度,结合突触可塑性,进一步分析针刺镇痛累加效应的作用机制。
目的:观察电针(EA)镇痛的累积效应,及其与海马和下丘脑神经元结构及功能的可塑性改变及相关蛋白表达的关系,探讨针刺缓解慢性疼痛累积效应的生物学机制。
方法:Wistar雌鼠98只,随机分为正常对照组(n=14),慢性压迫性损伤(CCI)组(n=42),去卵巢(OVX)+CCI组(n=42)。后2组又各分为不电针、EA2天(2D)和2周(2W)组,每组14例。用结扎坐骨神经诱发发慢性压迫性损伤造成慢性神经痛的模型;去除双侧卵巢加上颈背部皮下注射D-半乳糖造成神经记忆损伤的模型。用水迷宫法测试动物学习记忆能力。电针双侧“阳陵泉”-“足三里”(1-2mA,2/15Hz,30min/time)穴,1次/天(D),不同组分别电针2天(D)、2周(W)。辐射热照射测定大鼠缩腿潜伏期(paw withdrawallatency,电针组动物电针后第二天测定其后效应),以两足的差值作为痛敏分数(hyperalgesia score,HAS)。CCI后第18天灌流取材,免疫组化实验用40%的多聚甲醛灌流,电镜实验用2%的多聚甲醛和2%的戊二醛混合液灌流。用透射电子显微镜技术,观察电针后大鼠海马及下丘脑神经元突触界面相关参数(突触活性带长度、突触后致密物厚度、突触间隙、突触界面的曲率)的变化;用免疫组化法测定参与突触可塑性调节的蛋白Synaptophysin(SYN)、calcium/calmodulin-dependentprotein kinaseⅡ(CaMKⅡ)阳性产物在海马CA1、CA3区及下丘脑室旁核(paraventricular nucleus,PVN)的表达。
结果:
1)电针对CCI大鼠痛敏反应变化的影响
在单纯CCI动物上,与CCI对照组比,CCI术后第18天CCI+EA2D组的HAS变化不大(P＞0.05),而CCI+EA2W组HAS的绝对值显著减小(P＜0.05)。提示电针可以改善CCI动物的痛敏状态,并具有累积效应。在OVX+CCI复合模型动物上,趋势同上,但是与CCI+EA2W比较OVX+CCI+EA2W组HAS绝对值明显增大(P＜0.05),说明记忆损伤动物的电针累积效应较差。
2)电针对大鼠海马CA3区、下丘脑室旁核(PVN)区突触界面结构参数的影响
在单纯CCI动物上,与正常组比较,CCI术后第18天CCI组海马CA3区、下丘脑PVN区突触活性带长度、突触后致密物厚度、突触界面的曲率明显减小,突触间隙明显增大,有显著性意义(P＜0.05);说明慢性神经病理性疼痛模型大鼠上述脑区神经元突触结构产生明显病理性改变。与CCI组比较,CCI+EA2D组突触活性带长度、突触后致密物厚度、突触界面的曲率增大,突触间隙减小,但无显著性差异(P＞0.05);CCI+EA2W组突触活性带长度、突触后致密物厚度、突触界面的曲率明显增大,突触间隙明显减小,有显著性意义(P＜0.05)。与CCI+EA2D组比较,CCI+EA2W组突触活性带长度、突触后致密物厚度、突触界面的曲率明显增大,突触间隙明显减小,有显著性意(P＜0.05);提示慢性疼痛可能降低了突触间信息的传递,而电针可以调整突触界面的相关参数,从而对突触进行重塑,并有累积效应。OVX+CCI复合模型3组动物,其突触结构各参数变化的趋势同上,与CCI+EA2W比较OVX+CCI+EA2W组突触活性带长度、突触后致密物厚度、突触界面的曲率明显减小,突触间隙明显增大,有显著性意义(P＜0.05);记忆损伤后突触的可塑性降低,可减弱针刺镇痛的累积效应。
3)电针对海马CA1、CA3区及下丘脑室旁核(PVN)的SYN、CaMKⅡ阳性产物表达的影响:与CCI组比较,CCI+EA2W组下丘脑PVN、海马CA1、CA3区SYN、CaMKⅡ积分灰度值明显降低(表达上调;P＜0.05),而CCI+EA 2D组无明显变化。OVX+CCI+EA2W组三脑区SYN、CaMKⅡ积分灰度值明显低于OVX+CCI组(P＜0.05),而显著高于CCI+EA2W组(P＜0.05)。说明海马及下丘脑SYN、CaMKⅡ表达上调与针刺累积效应密切相关;神经记忆力的减退在一定程度上减弱针刺镇痛的累积效应。
结论:
1)电针“阳陵泉”-“足三里”可明显减轻CCI后出现的疼痛反应,且有累积效应;记忆损伤后减弱电针的累积效应;
2)电针“阳陵泉”-“足三里”可以重塑CCI引起的海马、下丘脑突触界面的变化,增大突触活性带长度、突触后致密物厚度、突触界面的曲率、减小突触间隙,增强突触间信息的传递,并且有累积效应;记忆损伤使突触的可塑性下降,降低了突触间信息的传递,影响了大脑对针刺信息的记忆,从而减弱电针的累积效应。
3)电针“阳陵泉”-“足三里”可以上调大鼠海马和下丘脑组织中SYN、CaMKⅡ表达,且有累积效应,与动物神经记忆能力有密切联系。因此,重复电针“阳陵泉”-“足三里”穴可以减轻慢性痛,并有累积效应。海马及下丘脑SYN、CaMKⅡ表达上调与针刺累积效应密切相关;而记忆损伤后神经元可塑性下降,影响了这种累积效应。本实验的创新点即从神经记忆的角度,结合突触可塑性,分析电针“阳陵泉”-“足三里”镇痛累加效应的作用机制。
