苦温燥湿法调控湿阻中焦证动物模型肠道水糖代谢异常的机制研究

目的：研究苦温燥湿法对湿阻中焦证在水糖代谢失调方面的作用机制,为中医脾主运化理论、为中焦湿阻证的认识、为临床应用苦温燥湿法治疗中焦湿阻证提供实验依据。 方法：采用前期研究较成熟的湿阻中焦证动物模型。通过免疫组化的方法测定相关水通道蛋白及葡萄糖转运载体在肠道的分布表达情况以观察苦温燥湿法对模型动物水糖代谢差异的情况；通过酶联免疫法测定肠道组织中相关水通道蛋白、葡萄糖转运载体、钠-钾ATP酶、钙ATP酶等含量以探索造模及治法对模型动物水糖代谢差异的机制。 结果： 一、相关水通道蛋白在肠道的表达 1.相关水通道蛋白在肠道的分布 AQP1在空肠粘膜表达增加；AQP2在空肠粘膜、结肠粘膜及直肠粘膜表达增加；AQP3在空肠粘膜表达增加；AQP5在直肠粘膜表达增加；AQP7在空肠和直肠粘膜表达增加。 AQP7在空肠外膜表达减少；AQP9在空肠外膜表达减少。 2.相关水通道蛋白在肠道含量的测定 AQP0在结肠组织含量减少,在直肠组织含量增加；AQP2在结肠粘膜下组织含量减少,在直肠粘膜下组织含量增加；AQP3在空肠粘膜下组织、结肠粘膜含量增加,在结肠粘膜下组织、直肠粘膜下组织含量减少。 二、相关葡萄糖转运载体在肠道的表达 1.相关葡萄糖转运载体在肠道的分布 GLUT2在空肠粘膜下组织、直肠粘膜、直肠粘膜下组织表达增多；GLUT3在空肠粘膜、直肠粘膜、直肠外膜表达增多；GLUT5空肠外膜表达增多；SGLTI在空肠粘膜下组织、结肠粘膜下组织表达增多。 GLUT2在结肠粘膜下组织、直肠粘膜表达减少；GLUT3在结肠粘膜表达减少；GLUT5在结肠粘膜下组织、直肠外膜表达减少；SGLTI在空肠粘膜、结肠粘膜表达减少。 2.相关葡萄糖转运载体在肠道含量的测定 湿阻中焦证GLUT及SGLT表达增多 空肠粘膜下组织：GLUT2、GLUT3、SGLT1; 结肠粘膜下组织：SGLTl； 直肠粘膜下组织：GLUT2、GLUT3、SGLT1。 湿阻中焦证GLUT及SGLT表达减少 空肠粘膜下组织：GLUT5; 结肠粘膜下组织：GLUT2、GLUT3、GLUT5; 直肠粘膜下组织：GLUT5。 三、钙相关因子在肠道含量的测定 1.钙离子 钙离子在空肠、结肠粘膜下组织表达减少；在直肠粘膜下组织表达增多。 2.钙调蛋白 在结肠和直肠表达均增加。 3.钙ATP酶 在结肠表达减少,在直肠表达增加。 四、钠-钾ATP酶在肠道含量的测定 在结肠粘膜下组织表达增加；空肠、直肠粘膜下组织表达减少。 结论：研究发现,湿阻中焦证动物模型影响到了肠道相关水通道蛋白、葡萄糖转运载体分布和含量的改变,以及钠-钾ATP酶、钙ATP酶等相关因子的含量的改变；而通过苦温燥湿法的干预,则会在其中部分蛋白、酶等相关因子的作用环节产生影响。说明该治法能够对模型造成的肠道水糖代谢障碍起到改善的作用,这也可能是苦温燥湿法治疗湿阻中焦证的机理。