针刺对去势大鼠骨质疏松肠钙吸收分子机制研究

随着老龄化社会的到来,骨质疏松症已成为世界广泛关注的问题。研究表明:绝经后肠钙吸收障碍在绝经后骨质疏松（PMO）的发生与发展中有重要意义。雌激素替代疗法（HRT）可以纠正肠钙吸收障碍,但也会对身体产生不利影响,如子宫内膜出血、子宫内膜过度增生、升高甘油三脂、影响生理精神行为、引起偏头痛等,美国约40%-50%绝经后妇女拒绝接受或终止激素补充治疗。近年来对于针刺治疗骨质疏松症的研究日益增多,其安全无毒副作用的优点深受广大患者欢迎。研究针刺对绝经后肠钙吸收的影响,对阐明PMO的发病原理,探讨针刺防治PMO的可能机制有着重大的意义。 实验目的 采用双能X线骨密度仪、酶联接免疫吸附剂法（ELISA）测定去势大鼠股骨骨密度（BMD）、血清雌二醇（E2）水平,通过反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）测定OVX大鼠十二指肠粘膜Calbindin 9k、1,25（OH）2D3受体mRNA水平,揭示针刺调整肠道钙吸收的可能机制。实验方法 1.建立动物模型 健康雌性SD大鼠50只随机分5组:正常组、模型组、针刺组、西药组、中药组,每组各10只,除正常组外其它各组大鼠用2%的戊巴比妥钠作腹腔内注射麻醉,切除卵巢。术后1周,针刺组开始进行针刺,每日上午电针一次,每次电针持续20分钟;西药组灌服浓度为50mg/L的尼尔雌醇（5mg溶于100ml蒸馏水中）,每只灌服5ml/wk,其它时间灌服等量生理盐水;中药组灌服浓度为120g/L的骨松康胶囊（12g骨松康胶囊溶于100ml蒸馏水中）,每只灌服5ml/d;正常组和模型组同一时间每只灌服5ml/d生理盐水。其间,各组动物均正常饮食,自由饮水。投药8周后全部处死。 2.股骨BMD的检测 取出左侧股骨,采用双能X线骨密度仪检测大鼠股骨BMD。 3.血清E2的检测 采用摘眼球方法取血,取血量为6-10ml,离心,分离出血清,采用ELISA法检测血清E2水平。 4.十二指肠粘膜Calbindin 9k、1,25（OH）2D3受体mRNA的检测取出十二指肠标本,采用RT-PCR法测定去势大鼠十二指肠粘膜Calbindin 9k、1,25（OH）2D3受体mRNA水平。 实验结果 1.体重 模型组与正常组、针刺组、西药组、中药组大鼠体重比较均有显著性差异（P﹤0.01）,正常组、针刺组、西药组、中药组之间进行比较并无显著性差异,（P﹥0.05）。 2.股骨BMD 模型组与正常组、针刺组、西药组、中药组相比BMD明显降低,P﹤0.01 ,正常组、针刺组、西药组、中药组之间进行比较并无显著性差异,P﹥0.05。 3.血清E2含量 模型组与正常组、针刺组、西药组、中药组相比血清E2水平明显降低,P﹤0.05,西药组、中药组与正常组相比血清E2水平明显降低,P﹤0.05,西药组与中药组相比无显著性差异,P﹥0.05,正常组与针刺组之间无显著性差异,P﹥0.05。 4.十二指肠粘膜Calbindin 9k、1,25（OH）2D3受体mRNA水平 模型组比正常组、针刺组、西药组的Calbindin 9k mRNA的表达量小,正常组、针刺组、西药组之间无明显差别;模型组比正常组、针刺组、西药组的1,25（OH）2D3受体mRNA的表达量小,针刺组、西药组比正常组的1,25（OH）2D3受体mRNA的表达量小,针刺组与西药组之间无显著差异。 结论 针刺能够增加OVX大鼠BMD、血清E2水平,能够增加十二指肠粘膜Calbindin 9k、1,25（OH）2D3受体mRNA的表达量,提示针刺对OVX大鼠骨质疏松的治疗作用可能通过升高血清E2水平,从而刺激十二指肠粘膜Calbindin 9k、1,25（OH）2D3受体mRNA的表达量,使肠道钙吸收增加实现的。针刺还能降低OVX大鼠体重,提示针刺可能有对抗绝经后肥胖的作用。