P-糖蛋白在醋柳黄酮组分口服吸收中的作用与调控研究

中药药理活性成分的明确及其作用机制的研究，尤其是活性组分体内过程的明确是中药科学研究的关键问题，而中药活性组分吸收机理的研究是中药体内过程研究的第一步，是中药科学研究的瓶颈问题。揭示中药活性组分的吸收机理，明确其吸收过程中转运体的作用、作用机制与作用程度，以及中药中多种活性组分在吸收过程中的相互作用，有利于建立中药生物药剂学基础研究方法，揭示中药作用特点及组方理论的科学内涵。 本课题的目的为研究P-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp，MDR1）等外排型转运体在中药成分口服吸收过程中的作用，探索P-gp调控对其口服吸收的影响。研究工作选择临床长期应用、对心血管疾病具有显著预防与治疗作用的中药有效部位醋柳黄酮为模型药物，重点选择其中指标成分——异鼠李素等黄酮醇为研究对象，以基因工程细胞模型（MDR1转染MDCKⅡ细胞）、Caco-2细胞模型、整体实验动物模型三种吸收研究方法相结合，揭示“醋柳黄酮”组分的吸收机理及P-gp在其中的作用、P-gp调控对其吸收的影响、P-gp介导醋柳黄酮中各组分与异鼠李素在透膜过程中的相互作用。三种不同层次的研究方法得到的结果具有良好的相关性，醋柳黄酮中三种主要组分大鼠灌胃后药时曲线下面积、峰浓度大小均为山奈酚＞槲皮素＞异鼠李素；异鼠李素、槲皮素与山奈酚的Caco-2细胞模型A侧（apical，顶侧）到B侧（basolateral，基底侧）表观渗透系数分别为2.28±0.11、4.97±0.25、8.74±0.27(×10-6，cm.s-1)，B侧到A侧表观渗透系数分别为3.09±0.08、6.69±0.79、9.30±0.87(×10-6，cm.s-1)，比值分别为0.74、0.74与0.94，异鼠李素、槲皮素与山奈酚均存在肠道外排现象。在整体动物研究与Caco-2细胞转运研究的基础上，采用MDR1-MDCKⅡ细胞模型进一步研究了异鼠李素与P-gp的相互作用，异鼠李素MDR1-MDCKⅡ细胞模型A侧到B侧表观渗透系数为1.22±0.11(×10-6，cm.s-1)，B侧到A侧的表观渗透系数为4.96±0.03(×10-6，cm.s-1)，其比值为0.24，试验结果与前期试验结果具有良好的相关性，进一步确证了异鼠李素是P-gp的底物，由P-gp等外排型转运体介导的肠道外排与胆汁排泄导致醋柳黄酮中各组分药时曲线的多峰现象。 合用维拉帕米（P-gp抑制剂）与地高辛（P-gp底物）可增加异鼠李素的肠道吸收，增加异鼠李素的口服生物利用度；利福平等胆盐排泄抑制剂可抑制异鼠李素的胆汁排泄而增加其生物利用度。醋柳黄酮中其它组分与异鼠李素体内过程均存在不同程度的相互作用，合用后各自肠道吸收均不同程度地增加，P-gp功能的抑制是其体内药动学相互作用的机制之一，其它某些外排型转运体，如多药耐药性相关蛋白2与乳腺癌耐药相关蛋白1也可能是介导此相互作用发生的机制之一。因此，醋柳黄酮有效部位给药较其中组分单独给药更具有生物药剂学的优势，其中各组分可相互增加口服生物利用度。 在分子水平、细胞水平和整体动物水平研究中药组分的吸收过程，并分析各种研究结果的相关性，是探索最基本的微观物质与最复杂的宏观生命体协调统一规律的有效方法，是中药研究的有效途径。本课题研究可为中药物质基础的体内过程微观水平的研究提供新的思路与方法，寻求以中药物质基础在微观水平上的相互作用解释中药起效的机理与过程的方法，探求微观物质与宏观生命现象的契合点，进而为中药口服制剂剂型设计、处方筛选、工艺优化和质量评价提供生物药剂学指标与方法。