铁皮石斛组织培养技术及玻璃化防止措施研究

铁皮石斛是一种生长缓慢、自身繁殖能力很低的兰科附生植物,只能依靠自身绿叶进行光合作用。铁皮石斛从开花授粉至果实成熟约需6个月,由于借助昆虫异花传粉,一般授粉不良,结果甚少。在自然条件下,种子萌发因缺乏营养物质,需与真菌共生,以获得养分的供给才能完成萌发,发芽率极低。铁皮石斛药用历史上千年,但我国铁皮石斛的人工栽培仅有30余年历史,现虽浙江、云南等地有少数单位已实现规模化种植,但产量还远不能满足市场需求,且生产成本较高。在上世纪80-90年代,直接采集的野生铁皮石斛植物仍占相当高的比例,对野生铁皮石斛的需求量远超出资源承受能力,此毁灭式的采集方式,难以实现持续利用,因而野生铁皮石斛资源日渐枯竭。如何有效解决需求与资源之间的矛盾?惟一有效的途径是通过组织培养技术进行人工栽培。 本研究以铁皮石斛的种子和试管苗为材料,研究铁皮石斛组织培养中各环节的最佳激素配比以及减轻玻璃化。结果如下： 1.最佳消毒方法和时间的选择：采用0.1%氯化汞溶液短时间消毒处理铁皮石斛种子及茎段,萌芽率高,污染率低。 2.最佳外植体的选择：通过对多种外植体出愈率的比较,表明种子作为铁皮石斛的外植体最好。 3.增殖培养：通过对多种培养基的比较,此阶段的最适培养基配方是MS+IBAO.5 mgL-1+6-BA2.5mg L-1。 4.分化培养：通过对多种培养基的比较,此阶段的最适培养基配方是MS+NAAl.5mg L-1+6-BA1.5 mg L-1+5%香蕉提取液。 5.生根培养：通过对多种培养基的比较,生根阶段的最适培养基配方是MS+NAA1.5mg L-1。 6.炼苗移栽：适合铁皮石斛的移栽基质是锯末+珍珠岩；适合铁皮石斛的移栽的季节是5-6月。 7.减轻玻璃化：适度增加二氧化碳的浓度以及在60～80μmol.m-2.s-1的光照条件下,可以有效防止铁皮石斛试管苗玻璃化的发生,从而得到正常的转接植物。