糖尿病肾小球足细胞和裂孔膜损害机制及药物干预的实验研究

第一部分 糖尿病大鼠肾小球足细胞和裂孔膜损伤机制的实验研究 目的 观察糖尿病对肾小球足细胞和裂孔膜的影响，并探讨其可 能机制和作用。 方法 建立链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病动物模型，测定糖尿 病组和正常对照组大鼠尿白蛋白排泄率（UAER）、肾皮质丙二醛 （MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）活 性，应用免疫组织化学方法检测足细胞损伤标志蛋白－desmin 和裂孔 膜关键蛋白 nephrin 的蛋白表达，RT-PCR 方法检测 nephrin mRNA 的 表达，同时在电子显微镜下观察肾小球足细胞超微结构的改变。 结果 糖尿病组大鼠肾皮质 SOD 和 CAT 活性显著降低 （P<0.05），MDA 含量显著升高（P<0.05），同时，肾小球内 desmin 蛋白表达显著升高（P<0.05），nephrin mRNA 和蛋白表达显著 3 重庆医科大学博士研究生论文 降低（P 均<0.05），肾小球足细胞足突部分融合，尿白蛋白排泄率明 显增加（P<0.05）。 结论 糖尿病时肾组织抗氧化能力降低、氧化应激增高，可能损 害足细胞和裂孔膜，导致肾小球滤过屏障外层完整性破坏，尿白蛋白 排泄率增高，这可能是糖尿病肾脏损害、蛋白尿发生的机制之一。 4 重庆医科大学博士研究生论文 第二部分 氯沙坦对糖尿病大鼠肾小球 足细胞和裂孔膜的影响及其机制研究 目的 探讨血管紧张素 II （Ang II）1型受体拮抗剂氯沙坦对糖尿 病大鼠肾小球足细胞和裂孔膜的影响及其机制。 方法 建立链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病动物模型。大鼠随 机分为正常对照组（N）、糖尿病组（D）、糖尿病＋氯沙坦组 （DL）。检测 24h 尿白蛋白排泄率水平，测定肾皮质 MDA 含量及 SOD、CAT 活性，免疫组织化学方法检测肾小球 desmin 和 nephrin 蛋 白表达，RT-PCR 方法检测 nephrin mRNA 表达，同时用电子显微镜观 察各组肾小球足细胞超微结构的变化。 结果 与正常对照组比较，糖尿病组大鼠肾皮质 SOD 和 CAT 活 性降低，而 MDA 含量增加，肾小球内 desmin 蛋白表达显著上调， nephrin mRNA 和蛋白表达明显降低，足细胞部分足突融合，尿白蛋 白排泄率增高（P 均<0.05）；氯沙坦明显减轻糖尿病大鼠肾皮质 SOD、CAT、MDA 及肾小球内 desmin、nephrin 蛋白和 mRNA 表达的 改变，减轻足细胞足突融合，降低尿白蛋白排泄率。 5 重庆医科大学博士研究生论文 结论 氯沙坦通过拮抗 Ang II 的效应，增强糖尿病大鼠肾脏抗氧 化能力，减轻氧化应激，保护肾小球滤过屏障外层裂孔膜和足细胞的 结构与功能，减少蛋白尿，延缓糖尿病肾病的发生发展，可能是氯沙 坦保护糖尿病肾脏的机制。 6 重庆医科大学博士研究生论文 第三部分 抗坏血酸对糖尿病大鼠肾小球 足细胞和裂孔膜的影响及其机制研究 目的 研究抗坏血酸对糖尿病大鼠肾小球足细胞和裂孔膜的影响 及其机制。 方法 建立链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病动物模型。大鼠随机 分为正常对照组（N）、糖尿病组（D）、糖尿病＋抗坏血酸组 （DA）。检测总胆固醇（TC）、24h 尿白蛋白排泄率、肾皮质 SOD 和 CAT 活性及 MDA 含量，采用免疫组织化学方法测定肾小球 desmin 和 nephrin 蛋白表达，RT-PCR 方法测定 nephrin mRNA 表达，并利用 电子显微镜观察各组肾小球足细胞的超微结构。 结果 与正常对照组大鼠比较，糖尿病组大鼠 TC明显增高、肾皮 质 SOD 和 CAT 活性显著降低，MDA 含量明显增加，肾小球内 desmin 蛋白表达明显上调，nephrin mRNA 和蛋白表达显著降低，同 时伴肾小球足细胞部分足突融合、尿白蛋白排泄率增高（P 均 <0.05）；抗坏血酸干预治疗可明显降低糖尿病大鼠 TC 水平，增加肾 皮质 SOD 活性，降低肾皮质 MDA 含量和 desmin 蛋白表达水平，增 高 nephrin mRNA 和蛋白的表达，减轻足细胞足突融合，减少尿白 蛋 7 重庆医科大学博士研究生论文 白排泄率（P 均<0.05），肾皮质 CAT 活性虽有一定程度增高但差异 无显著性（P>0.05）。 结论 抗坏血酸能有效降低糖尿病大鼠 TC水平，减轻肾组织脂质 过氧化、抑制肾脏氧化应激，从而减少肾脏足细胞和裂孔膜损害，维 护肾小球滤过屏障外层的完整性，减轻蛋白尿，对糖尿病大鼠肾脏起 保护作用。