多花黄精多糖提取分离、分子量测定及其粗多糖的初步药效研究

本课题以多花黄精干燥根茎为原料,对黄精多糖进行了提取、分离及分子量测定研究。进行了多花黄精粗多糖的提取,并对提取的粗多糖进行了初步药效研究。 建立测定多糖含量的蒽酮硫酸—紫外分光光度法。以黄精多糖得率为评价指标,对水煎煮、水温浸和微波水溶液提取方法进行筛选,多糖得率分别为：21.6%、6.5%、17.9%,故选择水煎煮法为本研究的提取方法。以黄精多糖得率为评价指标,以提取次数、提取时间和用水量为正交实验的主要因素,每个因素设置三个水平,进行L9(3)4正交实验优选提取工艺参数,并对影响醇沉纯化工艺的固液比和醇沉浓度参数进行优化。实验筛选出最佳工艺条件为：10倍水煎煮3次,每次2h,浓缩至固液比为1：1,醇浓度为75%。本提取纯化工艺所得黄精粗多糖得率约为28%。 以蛋白脱除率和多糖保留率为评价指标,采用加权综合评分法比较Sevage法和三氯乙酸法(TCA)法的脱蛋白,结果表明Sevage法经6次萃取,蛋白脱除率可达72.7%,多糖保留率为84.6%。黄精粗多糖经脱蛋白、脱色、透析后,再上DEAE-52纤维素柱,用水、0.1mol/L、0.5mol/L的氯化钠洗脱,得到黄精多糖PCPd-1、PCPd-2、PCPd-3,三种组分再分别经Sephadex G-150柱纯化,得到黄精多糖PCPs-1、PCPs-2、PCPs-3,经高效凝胶色谱法检测,均呈单一对称峰,说明样品为均一多糖。 黄精多糖PCPs-1、PCPs-2、PCPs-3在紫外光谱260nm及280nm处无明显吸收,说明不含有核酸和蛋白质。在红外光谱显示具有一般多糖类物质的特征吸收峰,在889.1cm-1、891.1cm-1、891.1cm-1处有吸收峰,表明该多糖糖苷键为β构型。针对黄精多糖进行了初步薄层鉴别,结果表明,PCPs-1和PCPs-2分别含有葡萄糖和半乳糖,黄精多糖PCPs-3主要含有半乳糖。采用HPGPC-ELSD法测定黄精多糖分子量,色谱柱为Shodex OHpak SB-804HQ(8.0×300mm),流动相为0.1mol/L醋酸铵,流速0.8mL/min,柱温30℃。测定结果：黄精多糖PCPs-1, PCPs-2, PCPs-3数均分子量分别为5640、4760、4380道尔顿,重均分子量分别为13000、13900、12200道尔顿,分布系数分别为2.31、2.93、2.80。 采用水提醇沉的方法提取黄精粗多糖,并通过溶剂法把多糖粗分为黄精粗多糖1(CPPC-1)和黄精粗多糖2(CPPC-2)两个部分,并对两个部分进行了初步的体外增强免疫力实验。采用MTT法观察了黄精粗多糖CPPC-1和CPPC-2对淋巴细胞转化和增殖作用的影响,同时采用Griess法测定了黄精粗多糖CPPC-1和CPPC-2样品诱导RAW264.7细胞生成NO的影响。实验结果表明：黄精粗多糖CPPC-1和CPPC-2对淋巴细胞转化作用没有协同效应；对脾淋巴细胞有一定的增殖作用,黄精粗多糖在CPPC-1为50ug/mL、黄精粗多糖CPPC-2为500ug/mL时其最大促进率分别达20.3%和13.3%；两种粗多糖均不能诱导RAW264.7细胞生成NO。说明黄精粗多糖可能具有增强免疫力的活性。