电针、艾灸预处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠自噬相关蛋白LC 3Ⅱ及Beclin 1表达的影响

目的:观察电针、艾灸预处理对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠自噬相关蛋白LC 3II、Beclin 1表达的影响,探讨电针、艾灸预处理在MIRI过程中对自噬调控可能的作用机制,并比较电针和艾灸预处理与IP预处理的效应差异。方法:将40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、缺血预适应(IP)组、电针组和艾灸组,每组8只。电针组及艾灸组造模前分别电针或艾灸“内关”穴,每次20min,每日1次,连续7d。各组分别于预处理7d后行冠脉结扎法建立大鼠MIRI模型。HE染色及透射电镜检测左心室心肌病理形态学的变化,Tunel法检测心肌细胞凋亡情况及凋亡指数,Western blot法检测LC 3、Beclin 1蛋白在心肌细胞中的表达情况。结果:1.各组大鼠HE染色及超微结构结果:与假手术组比较,模型组心肌损伤较严重,心肌细胞排列紊乱、边界模糊,炎性细胞浸润,部分横纹坏死、溶解,线粒体结构紊乱、模糊,空泡化严重,并出现大量双层膜结构的自噬小体;与模型组比较,IP组、电针组及艾灸组心肌损伤较轻微,肌纤维大多正常,肌丝间局灶性水肿,线粒体丰富伴空泡增多,偶见自噬体。2.Tunel结果:与假手术组比较,模型组凋亡指数显著高于假手术组(P<0.01);与模型组比较,IP组、电针组、艾灸组凋亡指数均显著低于模型组(P<0.01);电针组凋亡指数低于IP组及艾灸组(P<0.05)。3.LC 3及Beclin 1蛋白的表达:与假手术组比较,模型组LC 3II、Beclin 1蛋白的表达及LC 3II/LC 3I的比值明显升高(P<0.01);与模型组比较,IP组、电针组及艾灸组LC 3II、Beclin 1蛋白的表达及LC 3II/LC3I的比值明显降低(P<0.01);电针组LC 3II、Beclin 1蛋白的表达及LC 3II/LC 3I的比值明显低于IP组及艾灸组(P<0.05);艾灸组LC 3II及Beclin 1蛋白表达及凋亡指数与IP组相比均无明显差异(P>0.05)。结论:1.IP预处理、电针及艾灸“内关”穴预处理对MIRI大鼠均具有预保护作用。2.IP预处理、电针及艾灸“内关”穴预处理均能对MIRI过程中的自噬产生调节作用,即均能下调LC 3II、Beclin 1蛋白的表达,降低LC 3II/LC 3I的比值,尤以电针对MIRI过程中自噬水平的调节作用最佳。3.这种适度调节自噬水平、对抗凋亡,促进心肌细胞存活的机制可能与Beclin 1介导的自噬/凋亡互反馈机制有关。