利用SSR和RAPD技术构建柑桔分子遗传图谱

柑桔是世界上最重要的果树树种之一；目前全世界栽培柑桔约1亿亩，年产1.1亿吨以上，年贸易额约80亿美元，为全球第四大贸易农产品。我国柑桔业近几十年来得到了迅猛发展，柑桔已成为我国南方最大宗的果树树种，栽培面积达2400多万亩(居世界首位)，产量近1500万吨(世界第二位)，若以每吨柑桔鲜果产值1000元计，2004年全国柑桔产值高达150亿元以上。柑桔业已成为我国南方广大山区、贫困区和三峡库区农村经济的支柱产业之一，在社会主义新农村建设、农民脱贫致富奔小康、山区水土保持和三峡库区移民安置中发挥了重要作用。 品种的实时更新换代是各种产业可持续稳定发展的基础，我国柑桔产业的发展也不例外。特别是加入WTO后，面对激烈的国际市场竞争，我国进行大规模的柑桔品种更新换代和结构调整显得尤为迫切。但迄今为止，我国自主培育的优新柑桔品种很少，加之受到知识产权的限制，目前可以利用的品种远不能满足品种更新换代的需求，因此培育具有自主知识产权和适应市场需要的柑桔优良新品种对我国柑桔产业发展具有重要意义。然而，柑桔常规育种效率低，育种进程缓慢，短期内难以培育获得优良新品种。 近年来蓬勃发展的植物分子育种技术为柑桔业提供了一条全新、高效的育种途径。利用分子生物学技术和手段，针对柑桔育种中的重要性状和重要问题，深入开展基因的遗传、定位、克隆和调控机理等研究，通过分子标记辅助育种(MAS)和基因工程等方法进行柑桔重要性状的定向改良，创造新的品种类型，将大大提高柑桔育种效率，加快育种进程。分子遗传图谱的构建是植物基因组研究的重要内容之一，是分子育种研究的重要基础。高密度的分子遗传图谱已有效地应用于基因定位、图位克隆基因、重要农艺性状QTL定位、分子标记辅助育种(MAS)和比较基因组学等研究中。因此，对具有重要经济价值和迫切的育种需求的柑桔类果树来说，构建分子遗传图谱具有重要意义。 本研究以清见桔橙(C．reticulata × C．sinensis)(母本)与强德勒柚(C．grandis Osb)(父本)的F1代102株为作图材料，利用SSR和RAPD两种标记，围绕柑桔分子遗传图谱的构建，进行了柑桔基因组DNA提取方法的改进、适用于柑桔的SSR标记体系的建立以及SSR和RAPD标记的分离分析等方面研究，并最终构建了柑桔分子遗传图谱。主要结果如下： 1、适合SSR分析和RAPD分析的柑桔基因组DNA提取方法 在CTAB溶液中加入抗氧化剂1％PVP和0.2％β-巯基乙醇，提取的DNA粗提物呈无色透明