HSV-tk/GCV自杀基因系统对骨肉瘤细胞体外杀伤效应

被引：9

作者：

胡铁山

李贵涛

机构：

[1] 广东省医院骨科,广东省医院骨科广东广州,广东广州

来源：

第四军医大学学报 | 2004年 / 03期

关键词：

骨肉瘤; HSV-tk基因; 基因治疗;

D O I：

暂无

中图分类号：

R738.1 [骨骼肿瘤];

学科分类号：

100402 [劳动卫生与环境卫生学];

摘要：

目的 :观察HSV tk/GCV系统对骨肉瘤细胞SAOS 2的体外杀伤作用 .方法 :构建tk基因逆转录表达载体pL(tk)SN ,在lipofectamine2 0 0 0介导下转染PA31 7包装细胞 ,G4 1 8筛选 ,直至出现抗性克隆 ,扩大培养 ,用NIH3T3测定病毒滴度 ,将重组病毒感染人骨肉瘤细胞SAOS 2 ,G4 1 8筛选出抗性克隆命名为SAOS/tk ,以RT PCR及Southernblot检测tk基因的整合及表达 .观察tk基因修饰细胞生长状况及MTT法观察前药对tk基因修饰骨肉瘤细胞的杀伤效应 .结果 :RT PCR及South ernblot分析证明tk基因在人骨肉瘤细胞系SAOS 2中有整合及表达 ;SAOS/tk与未转基因的原肿瘤细胞相比 ,两者生长速度及形态结构无明显差别 ;在前药敏感性试验中 ,GCV对SAOS/tk细胞的杀伤作用十分明显 ,半数致死量约为 1mg/L ,而亲本细胞SAOS 2和空白质粒转染SAOS/0细胞 ,半数致死量大于 1 0 0mg/L .tk基因修饰细胞与不同比例亲本细胞混合后经GCV治疗 ,SAOS/tk占混合细胞总数的 2 0 %时即可杀伤约 5 0 %的混合培养细胞 .结论 :人骨肉瘤细胞系SAOS 2对HSV tk/GCV系统高度敏感 ,并且有明显的旁观者效应 ,可望成为骨肉瘤基因治疗的新途径

引用

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页数：4

共 2 条

[1]

产生重组逆转录病毒包装细胞系建立及病毒滴度影响因素 [J].