透骨消痛颗粒诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞的分化

背景:研究表明,透骨消痛颗粒通过有效抑制细胞因子、基质金属蛋白酶3、氧自由基的生物效应来延缓关节宏观形态、软骨基质及软骨细胞退变的作用。目的:验证透骨消痛颗粒含药血清促进骨髓间充质干细胞增殖和诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的影响。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2006-12/2007-08在福建中医学院中西医结合研究院分子生物学实验室完成。材料:选用清洁级4周龄SD大鼠80只。透骨消痛颗粒,由巴戟天、杭白芍、青风藤、川芎等组成,由福州屏山药厂制作。方法:取72只SD大鼠随机分为5组,透骨消痛颗粒的水提物高剂量组、水提物中剂量组、水提物低剂量组、醇提物组各16只,空白对照组8只,分别以含14,7,3.5g/(kg?d)药量的水溶液2mL灌胃,对照组以等量生理盐水2mL灌胃,2次/d,连续给药3d后,腹主动脉采血制备血清。从另8只4周龄SD大鼠骨髓中分离出骨髓间充质干细胞,体外传代培养,取第2代骨髓间充质干细胞分为空白对照组﹑软骨诱导剂组及透骨消痛颗粒组,通过透骨消痛颗粒含药血清诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化。主要观察指标:采用MTT法检测骨髓间充质干细胞增殖和免疫组织化学检测Ⅱ型胶原在细胞分化过程中的表达。结果:透骨消痛颗粒含药血清各组均能促进骨髓间充质干细胞增殖,与空白对照组相比差异均有非常显著性意义(P<0.01),中剂量药物浓度时达到最大效应(P<0.01),中剂量1h组与2h组相比差异无显著性意义(P>0.05)。透骨消痛颗粒含药血清能增强Ⅱ型胶原在细胞分化过程中的表达,与空白对照组相比差异有非常显著性意义(P<0.01),与软骨诱导剂组相比差异有显著性意义(P<0.05)。结论:透骨消痛颗粒含药血清能有效促进骨髓间充质干细胞增殖和诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化。