共培养法神经细胞诱导骨髓间充质干细胞向神经元的分化

背景:目前神经细胞是否具有直接诱导骨髓间充质干细胞分化为神经元的作用还未见报道。目的:拟在体外建立人骨髓间充质干细胞和神经细胞的共培养体系,观察共培养条件下神经细胞对骨髓间充质干细胞分化为神经元的影响。设计、时间及地点:分组对照,体外细胞学实验,于2006-12/2007-12在山东省青岛大学医学院附属医院中心实验室完成。材料:骨髓间充质干细胞来源于青岛大学医学院附属医院行自体干细胞移植治疗的糖尿病患者骨髓血,神经细胞取材于分娩过程中窒息死亡的新生儿脑组织,传至第3代用于实验。用于细胞共培养的Transwell双层培养皿为Corning Costar公司产品,培养体系孔径小于3.0μm,细胞不会迁徙通过,但上、下层培养液可互通融合。方法:共培养组将神经细胞按1×106密度接种于Transwell双层培养皿的底层,上层接种骨髓间充质干细胞,加入LG-DMEM培养基,培养4～5d。对照组上、下层均接种骨髓间充质干细胞。主要观察指标:观察骨髓间充质干细胞的形态变化,免疫荧光染色检测骨髓间充质干细胞中神经元特异性标志物的表达。结果:共培养组骨髓间充质干细胞生长伸展,呈放射状突起,并可相互连接,神经元特异性烯醇化酶阳性率为(32.7±11.5)%,表现神经元细胞的特性。对照组骨髓间充质干细胞形状扁而宽,未形成神经样形态结构,神经元特异性烯醇化酶呈阴性。结论:神经细胞生长过程中提供的微环境对骨髓间充质干细胞分化为神经元具有诱导促进作用。