青鱼β-actin基因克隆及其启动子功能的初步检测(英文)

高保真 PCR 克隆青鱼β-actin 基因开放阅读框和 5′端侧翼序列,DNA 测序结果表明:青鱼β-actin 基因开放阅读框编码一段含 375 个氨基酸的蛋白,与其他物种 actin 家族相比较具有高度保守性。青鱼β-actin 与鲤鱼、草鱼及斑马鱼的同源性均为 100%,而与人和 Norway 鼠β-actin 的同源性均为 99.2%,与鸡和 Kenyan 爪蟾β-actin 的同源性分别为 98.9%和98.1%。将青鱼β-actin 基因 5′端启动调控区插入不含启动子的 pEGFP1 载体构建青鱼β-actin 启动子/EGFP 表达载体,与第一次卵裂之前显微注射该重组质粒入泥鳅受精卵,同时也用该重组质粒转染 HeLa 细胞系。观察结果表明:GFP 在 50%的泥鳅胚胎和 2/3 的 HeLa 细胞有所表达。GFP 在泥鳅胚胎的各个部分均有表达,且在某些胚胎中 GFP 的表达遍布全身。因此,以 EGFP 为报告基因证实了青鱼β-actin 基因启动子为一种非特异性表达的启动子。