鸭β-防御素9基因的克隆、组织分布及其原核表达

被引：12

作者：

廖文艳 ^{[1
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]}

马得莹 ^{[1
]}

刘胜旺 ^{[2
]}

韩宗玺 ^{[2
]}

机构：

[1] 东北农业大学动物营养研究所

[2] 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室

来源：

中国农业科学 | 2009年 / 42卷 / 04期

关键词：

鸭; AvBD9; 组织分布; 重组蛋白; 抗菌活性;

D O I：

暂无

中图分类号：

S852.5 [血清学];

学科分类号：

090601 ;

摘要：

【目的】从鸭组织中克隆鸭β-防御素9(AvBD9)基因,在原核表达重组鸭AvBD9蛋白;研究重组鸭AvBD9蛋白的体外抗菌活性与理化特性。【方法】采用RT-PCR法,从鸭肝脏组织中扩增鸭AvBD9基因,测定该基因在鸭各组织器官中的分布;将鸭AvBD9基因克隆到大肠杆菌原核表达载体pGEX-6p-1上,构建重组表达质粒pGEX-duckAvBD9,将重组质粒转化大肠杆菌BL21,用IPTG诱导表达;亲和层析纯化蛋白,利用薄层平皿琼脂糖孔穴扩散法测定重组鸭AvBD9蛋白的体外抗菌活性与理化特性。【结果】从鸭肝脏组织中克隆得到鸭AvBD9基因,序列分析表明该基因大小为204bp,前体肽包括67个氨基酸残基。AvBD9基因在鸭体内广泛分布。SDS-PAGE电泳表明鸭AvBD9基因在大肠杆菌中高效表达,表达的重组鸭AvBD9融合蛋白以包涵体的形式存在,分子量约31kD。重组鸭AvBD9蛋白对大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、嗜酸乳杆菌、枯草芽胞杆菌有抗菌活性,在-70～100℃或pH3～10处理30min后仍有抗多杀性巴氏杆菌作用。【结论】鸭AvBD9基因为204bp,编码67个氨基酸残基,在鸭组织中广泛分布。重组鸭AvBD9蛋白基因在大肠杆菌中高效表达,该重组蛋白具有广谱的抗菌活性,对温度和酸碱性有较高的稳定性。

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页码：1406 / 1412

页数：7

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