一种新融合抗菌肽Hex-Mag基因的克隆、表达及其抗菌活性的研究

被引：12

作者：

李桂平 ^{[1
]}

陈仪本 ^{[2
]}

机构：

[1] 中国科学院南海海洋研究所

[2] 广东省微生物研究所广东省菌种保藏与应用重点实验室

来源：

微生物学报 | 2007年 / 01期

关键词：

Hexapeptide(RRWQWR); Magainin1-12; 重叠区扩增基因拼接法; 融合肽Hex-Mag;

D O I：

10.13343/j.cnki.wsxb.2007.01.024

中图分类号：

Q78 [基因工程（遗传工程）];

学科分类号：

071007 ; 0836 ; 090102 ;

摘要：

通过在Magainin1-12(GIGKFLHSAKKF)的N端添加碱性氨基酸片段Hexapeptide(RRWQWR)以增强其对细胞膜的吸附能力来提高Magainin1-12的抗菌活性。利用Hexapeptide和Magainin1-12的基因序列,结合酵母偏爱密码子设计出新的融合基因Hex-Mag,通过重叠区扩增基因拼接法(Gene splicing by overlap extension,gene SOEing)利用PCR扩增出基因片段,再将融合基因进行酶切并纯化后导入穿梭质粒pPIC9中,构建受乙醇氧化酶1基因(AOX1)的启动子与转录终止区控制的酵母表达质粒,转化GS115毕赤酵母宿主菌,经表型筛选,阳性克隆用甲醇诱导表达。表达出的融合肽Hex-Mag分子量约2.3kDa,其耐热性强,在100℃条件下,其活性可维持3h以上。琼脂糖孔穴扩散法检测显示Hex-Mag对多种革兰氏阴性菌和阳性菌具有抑制活性,与Magainin1-12相比,其活性有明显增强,N端正电荷增加的预期效应得到初步体现。

引用

页码：115 / 120

页数：6

共 6 条

[1] DCD-1L在毕赤酵母中的克隆和表达 [J].

赖玉平 ;

彭沂非 ;

郁正艳 ;

黄静 ;

吴自荣 .

中国生物工程杂志, 2004, (02) :61-65

[2] 用于PCR实验的毕赤酵母基因组DNA制备方法的比较 [J].

剧海 ;

梁东春 ;

郭刚 ;

张镜宇 .

天津医药, 2003, (05) :270-272

[3] 抗菌肽琼脂糖孔穴扩散法与比浊法测活比较及其相关性附视频 [J].

李秀兰 ;

戴祝英 ;

张双全 .

南京师大学报(自然科学版), 1998, (02) :85-87

[4] 人工合成柞蚕抗菌肽D基因转入根癌农杆菌 [J].

李丹青 ;

徐飞 ;

黄自然 ;

陈章良 .

蚕业科学, 1990, (02) :110-112

[5] 柞蚕抗菌肽D基因的合成 [J].

徐飞 ;

施文 ;

王启松 ;

黄自然 ;

不详 .

科学通报 , 1988, (21) :1656-1659

[6]

Structure-antitumor and hemolytic activity relationships of synthetic peptides derived from cecropin A-magainin2 and cecropin A-melittin hybrid peptides. Shin SY,Lee MK,Kim KL,et al. Journal of Peptide Research . 1997

← 1 →