青葙苷A诱导肝癌HepG2细胞凋亡及相关机制研究

目的:研究中药青葙子中的齐墩果烷型三萜青葙苷A(celosin A,CA)对人肝癌HepG2细胞凋亡的诱导作用及其相关机制。方法:采用E-MEM培养基建立人肝癌HepG2细胞体外培养体系,采用细胞计数试剂盒(,CCK-8)检测细胞活力,噻唑蓝(MTT)法测定乳酸脱氢酶(LDH),免疫比色法检测细胞增殖情况,用4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4,6-2 amidine base-2-phenyl indole,DAPI)荧光染色观察细胞凋亡形态学变化,Western blot检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3/7和核转录因子kappa B(NF-κB)蛋白表达水平。结果:用0.22-3.5μmol·L-1CA处理过的HepG2细胞,LDH释放增加,呈剂量和时间依赖性。在CCK-8和5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)测定过程中,CA比标准药物抗HepG2活性更强,随浓度和作用时间的增加,细胞的活性不断下降,对HepG2增殖的抑制作用明显。DAPI染色观察用CA处理过的HepG2细胞浓缩明显,细胞核分散,染色质凝聚。Western blot结果显示用CA处理过的HepG2细胞Caspase-3/7的活性显著增加,NF-κB蛋白表达水平下降。结论:Celosin A具有诱导HepG2细胞凋亡的作用,其机制可能与激活Caspase-3/7和抑制NF-κB蛋白表达有关。