SDS-PAGE 法测定His-tag 融合蛋白分子量产生偏差的原因

Ｈｉｓ ｔａｇ／Ｎｉ ＮＴＡ系统是新发展起来的一个亲和纯化重组蛋白的有用工具，现常用于基因编码产物的特性研究中。ＳＤＳ ＰＡＧＥ是实验室测定蛋白质分子量通常采用的方法，而许多实验室用此方法检测Ｈｉｓ ｔａｇ融合蛋白时却常发现测得的分子量偏大，产生偏差的原因尚未阐明。为弄清这一问题，本实验室在研究一个Ｈｉｓ ｔａｇ融合蛋白Ｐ７３ Ｈｉｓ时，首先用ＳＤＳ ＰＡＧＥ法测得其分子量确实比理论计算值大，然后对其进行Ｃ末端氨基酸顺序测定、电喷雾质谱分析，结果证实其实际分子量与理论值一致。酶切去除包括Ｈｉｓ ｔａｇ在内的部分肽段使ＳＤＳ ＰＡＧＥ法测量蛋白分子量的偏差大大降低，证实Ｈｉｓ ｔａｇ确实是造成偏差的原因之一。推测由于Ｈｉｓ ｔａｇ中的碱性氨基酸的作用造成蛋白在ＳＤＳ ＰＡＧＥ中迁移变慢，而导致偏差。这一现象值得引起有关研究者的注意。