副溶血弧菌tdh基因LAMP检测技术的建立

被引：9

作者：

程晓艳 ^{[1
,2
]}

刘庆慧 ^{[1
]}

黄倢 ^{[1
]}

机构：

[1] 农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室中国水产科学院黄海水产研究所

[2] 中国海洋大学食品科学与工程学院

来源：

中国食品学报 | 2012年 / 12卷 / 08期

关键词：

副溶血弧菌; 环介导等温核酸扩增; 耐热直接溶血毒素基因(tdh); 快速检测;

D O I：

10.16429/j.1009-7848.2012.08.028

中图分类号：

TS207.4 [食品的微生物检验];

学科分类号：

摘要：

环等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一种在等温条件下高特异性、高效、快速地扩增靶基因的DNA扩增技术。根据副溶血弧菌特异性的毒力基因tdh保守序列,本文设计1套特异性引物对该基因进行环等温扩增,同时对反应条件进行优化,建立携带tdh基因的致病性副溶血弧菌的LAMP快速检测技术。结果表明,LAMP最适反应在60.8℃恒温、45min内完成,与其它常见的细菌无交叉反应。LAMP方法的细菌DNA最低检出限为35.5fg/反应管,灵敏度较PCR方法高10倍。对扇贝样品中分离的菌株的检测表明,LAMP方法对检测致病性副溶血弧菌具有良好的可靠性。

引用

页码：156 / 162

页数：7

共 8 条

[1] LAMP检测单核细胞增生性李斯特氏菌的研究
袁耀武
张亚爽
马晓燕
张伟
[J]. 中国食品学报, 2009, (03) : 168 - 173
[2] 杀鲑气单胞菌的实时定量PCR检测方法的建立和应用
刘宗晓
刘荭
史秀杰
高隆英
岳志芹
吕建强
何俊强
江育林
谢从新
[J]. 海洋水产研究, 2008, (05) : 83 - 88
[3] 利用环介导等温扩增技术快速检测水产品中的副溶血弧菌
徐芊
孙晓红
赵勇
潘迎捷
[J]. 农业生物技术学报, 2008, (05) : 780 - 786
[4] 同时检测两种对虾病毒和4种弧菌的同步PCR方法的建立
许拉
黄健
戈蕾
杨冰
[J]. 海洋水产研究, 2008, (04) : 39 - 45
[5] Rapid and Specific Detection of the Thermostable Direct Hemolysin Gene in Vibrio parahaemolyticus by Loop-Mediated Isothermal Amplification
Nemoto, Jiro
Sugawara, Chiyo
Akahane, Kenji
Hashimoto, Keiji
Kojima, Tadashi
Ikedo, Masanari
Konuma, Hirotaka
Hara-Kudo, Yukiko
[J]. JOURNAL OF FOOD PROTECTION, 2009, 72 (04) : 748 - 754
[6] Accelerated reaction by loop-mediated isothermal amplification using loop primers
Nagamine, K
Hase, T
Notomi, T
[J]. MOLECULAR AND CELLULAR PROBES, 2002, 16 (03) : 223 - 229
[7] Detection of total and hemolysin-producing Vibrio parahaemolyticus in shellfish using multiplex PCR amplification of tl , tdh and trh[J] . Asim K. Bej,Donald P. Patterson,Cynthia W. Brasher,Michael C.L. Vickery,Daniel D. Jones,Charles A. Kaysner. Journal of Microbiological Methods . 1999 (3)
[8] Development of a loop-mediated isothermal amplification assay for sensitive and rapid detection of Vibrio parahaemolyticus .2 Yamazaki,W,Ishibashi,M,Kawahara,R. et al. BMC Microbiology . 2008

← 1 →