均匀设计优化建兰ISSR-PCR体系

被引：16

作者：

胡薇 ^{[1
]}

黄儒珠 ^{[1
]}

孙端 ^{[2
]}

饶春荣 ^{[3
]}

李锦凤 ^{[4
]}

机构：

[1] 福建师范大学生命科学学院

[2] 福建省林业检查总站

[3] 连城县朋口镇福建兰花基地

[4] 中国兰协建兰样品园

来源：

生命科学研究 | 2007年 / 01期

关键词：

建兰; ISSR-PCR; 均匀设计;

D O I：

10.16605/j.cnki.1007-7847.2007.01.012

中图分类号：

S682.31 [兰科植物]; Q943.2 [植物基因工程];

学科分类号：

090706 ; 071007 ; 090102 ;

摘要：

采用均匀设计,对影响建兰ISSR-PCR体系的引物、Mg2+、dNTP和TaqDNA聚合酶浓度等进行4因素5水平和4因素3水平两轮优化,建立了适合于建兰ISSR-PCR的反应体系:在20μL反应体系中,含引物0.25μmol/L、Mg2+2.5mmol/L,dNTP0.2mmol/L、TaqDNA聚合酶1.5U和模板DNA 40ng.在此基础上对扩增程序中的循环次数和退火温度,以及ISSR引物进行筛选.筛选获得的扩增程序为:94℃预变性5min;接着进行32个循环:94℃变性35s,52～56℃退火45s,72℃延伸90s;循环结束后,72℃延伸10min.同时筛选得到14个扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物.

引用

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页数：6

共 11 条

[1] 白桦ISSR-PCR反应体系的优化 [J].