黄芪甲苷通过激活PI3K/AKT通路抑制内皮细胞内质网应激介导的细胞凋亡的研究

目的:探讨黄芪甲苷对H2O2作用下血管内皮细胞凋亡的影响及作用机制。方法:体外培养人脐静脉血管内皮细胞,H2O2作用于人脐静脉血管内皮细胞诱导其凋亡,设置空白对照组、模型组（400μmol/L H2O2处理）、不同浓度（50、100μmol/L）黄芪甲苷组、LY294002（PI3K抑制剂） 10μmol/L组。使用MTT法检测各组细胞活力;流式细胞术检测各组细胞凋亡率; ELISA法检测各组细胞培养液中NO、TNF-α和IL-6的浓度变化; DHE荧光探针检测ROS的变化;特定试剂盒检测乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、还原型谷胱甘肽（GSH-PX）含量; Western blot法检测各组GRP78、CHOP、Caspase12蛋白表达水平以及AKT的磷酸化情况。结果:与空白对照组相比,H2O2损伤组能够显著降低HUVECs的活力,增加细胞中ROS的含量和凋亡率,LDH、MDA含量显著增加,SOD、GSH-PX活性显著下降,同时降低NO分泌,诱导TNF-α和IL-6分泌及增加了GRP78、CHOP、Caspase12的表达,而P-AKT/AKT表达显著降低。黄芪甲苷50μmol/L、100μmol/L和H2O2同时作用HUVECs时,细胞存活率显著上升,ROS含量及凋亡率显著下降,LDH、MDA含量显著下降,SOD、GSH-PX活性随之上升,同时NO分泌增加,TNF-α和IL-6分泌及GRP78、CHOP、Caspase12蛋白表达显著下降,P-AKT/AKT表达显著增加。LY294002组上述指标的检测结果与黄芪甲苷组相反。结论:黄芪甲苷能够提升H2O2作用下HUVECs活力,降低凋亡率,恢复细胞分泌功能,增强细胞抗氧化能力,减少细胞的炎性反应,黄芪甲苷可能部分通过激活PI3K/AKT通路抑制内皮细胞内质网应激,从而对血管内皮细胞发挥保护作用。