阻断IgG-FcγR结合短肽在抗中性粒细胞胞浆抗体促进中性粒细胞凋亡中的作用

目的利用阻断IgG-FcγR结合的短肽,观察FcγR在抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)促进中性粒细胞凋亡过程中的作用。方法人工合成短肽tg19320并鉴定其与人IgG的结合,玫瑰花环形成试验鉴定其阻断IgG-FcγR间的作用。提纯ANCA IgG并鉴定,体外分离健康人中性粒细胞。tg19320预处理经TNF-α预激的粒细胞1．5 h后,ANCA(200μg／ml)刺激粒细胞,分别在3、6、9、12和18 h收获细胞。流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位及凋亡细胞之Sub- G1峰变化,结合DNA缺口末端标记技术观察tg19320对ANCA促进中性粒细胞凋亡的抑制作用。结果(1)tg19320剂量依赖性与人IgG结合(P<0．01),并显著阻断IgG与FcγR的相互作用(玫瑰花环形成率20．3％比53．2％,P<0．01)。(2)正常粒细胞凋亡率随孵育时间增加,TNF-α在6 h前促进粒细胞凋亡而之后抑制粒细胞的凋亡:ANCA进行性促进经TNF-α预处理的粒细胞凋亡(P<0．01)。tg19320处理组粒细胞凋亡率在各时间点均低于ANCA作用组(P<0．01),而与正常对照组比较无显著差异。结论分支短肽tg19320可干预ANCA对中性粒细胞凋亡的促进, FcγR在ANCA促进中性粒细胞凋亡过程中具有关键作用。