小鼠SCP2基因shRNA重组腺病毒载体的构建与鉴定

被引：3

作者：

贾岩峰 ^{[1
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崔云峰 ^{[1
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李东华 ^{[1
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崔乃强 ^{[1
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彭雁飞 ^{[3
]}

宁召臣 ^{[3
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张琚 ^{[3
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机构：

[1] 天津市南开医院

[2] 天津医科大学南开临床学院

[3] 南开大学分子生物学研究所

来源：

中华肝胆外科杂志 | 2012年 / 02期

基金：

天津市自然科学基金;

关键词：

腺病毒科; 胆结石; 基因;

D O I：

暂无

中图分类号：

R575 [肝及胆疾病];

学科分类号：

100201 [内科学];

摘要：

目的构建小鼠SCP2基因shRNA重组腺病毒载体,进一步研究SCP2基因与胆囊胆固醇结石形成机制。方法（1）两步PCR法合成针对小鼠SCP2基因shRNA,并连接到质粒PDC312上;（2）采用AdMax TM Adenoviru5 Vector系统包装病毒,CsCl法纯化病毒、TCID50法测定滴度;（3）western印迹检测SCP2蛋白验证重组腺病毒沉默效果,RT-PCR检测重组腺病毒在小鼠hepa1～6细胞中SCP2、HMGCR、CYP7A1基因mRNA的表达。结果（1）腺病毒载体AdshlRNA和Adsh2RNA对sCP2均有抑制作用,在SCP2raRNA水平,与AdsshRNA组比较,AdshlRNA tD1=9.056,P<0.05,Adsh2RNA tD2=7.777,P<0.05,差异均有统计学意义,蛋白水平与mRNA一致;（2）scP2基因低表达时,CYP7A1 mRNA表达升高,t=10.68,P<0.05,HMGCR mRNA表达下降,t=10.10,P<0.05,差异有统计学意义。结论成功构建小鼠SCP2基因的shRNA重组腺病毒载体。SCP2低表达时可能影响HMGCoA还原酶和CYP7-α1羟化酶的活性,导致胆固醇代谢的变化,从而减少胆固醇结石的形成。

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