花鳗鲡脑cDNA文库的构建及GnRH基因克隆与表达分析

被引：16

作者：

黄海 ^{[1
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张勇 ^{[1
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刘晓春 ^{[1
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尹绍武 ^{[2
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杨丽萍 ^{[1
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朱培 ^{[1
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齐兴柱 ^{[2
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林浩然 ^{[1
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机构：

[1] 中山大学有害生物控制与资源利用国家重点实验室中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室

[2] 海南大学海洋学院热带生物资源教育部重点实验室

来源：

水生生物学报 | 2009年 / 33卷 / 02期

关键词：

花鳗鲡; cDNA文库; 促性腺激素释放激素; 克隆; 基因表达;

D O I：

暂无

中图分类号：

S917.4 [水产动物学]; Q78 [基因工程（遗传工程）];

学科分类号：

071007 [遗传学]; 090805 [渔业资源学];

摘要：

以花鳗鲡脑组织为材料,提取总RNA,应用CloneminerTM文库构建试剂盒构建cDNA文库。经检测,文库的滴度为4.3×106cfu/mL,总容量为5.16×107cfu/mL,阳性克隆率为99.6%,插入片段0.43—3.2kb之间,平均插入片段大小为1532bp。以文库为模板,克隆获得花鳗鲡两种类型的促性腺激素释放激素(mGnRH和cGnRH-II)cDNA序列。序列分析表明,花鳗鲡mGnRHcDNA开放阅读框(ORF)包含276个碱基,编码91个氨基酸,其中包括22个氨基酸的蛋白质前体信号肽(1—22位氨基酸)、mGnRH十肽(23—32位氨基酸)、一个三肽裂解位点(33—35位氨基酸)和56个氨基酸的GnRH相关肽(36—91位氨基酸);花鳗鲡cGnRH-IIcDNA开放阅读框包含264个碱基,编码87个氨基酸,其中包括24个氨基酸的蛋白质前体信号肽(1—24位氨基酸)、cGnRH-II十肽(25—34位氨基酸)、一个三肽裂解位点(34—36位氨基酸)和50个氨基酸的GnRH相关肽(37—87位氨基酸)。序列同源性分析表明,花鳗鲡mGnRH、cGnRH-IIcDNA与日本鳗鲡之间的相似性率高达98%;与鲑形目、鲈形目、鲽形目鱼类的相似率为73%—78%;而与鲤形目鱼类的相似性相对较低(63%—67%)。采用RT-PCR方法分析了两种GnRH基因在花鳗鲡雌雄个体中的表达,结果表明两基因在雌雄个体的组织表达模式无明显差异;但mGnRH基因在雌雄个体内表达部位多于cGnRH-II的。

引用

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页数：8

共 13 条

[1]

浅色黄姑鱼脑垂体cDNA文库的构建 [J].