浅色黄姑鱼脑垂体cDNA文库的构建

以浅色黄姑鱼脑垂体为材料,应用SMARTTM cDNA library construction技术,构建以真核表达载体pcD- NA3．1（+）为基础的浅色黄姑鱼cDNA文库。利用含Sfi I B酶切位点的oligo（dT）引物合成cDNA第一链,利用含Sfi I A酶切位点的SMART核苷酸作为cDNA第一链在mRNA5′端延伸出去的模板,采用LD PCR引物合成双链cDNA,双链cDNA用Sfi I酶切和过柱分级分离后,与引入Sfi I酶切位点的pcDNA3．1（+）-Sfi I载体进行连接,转化大肠杆菌TOP10感受态细胞,构建成脑垂体全长cDNA文库。经过质量鉴定,得到的原始cDNA文库含有约1×10～5个重组子,重组率为90%,插入cDNA片段长度范围约为0．4～3kb。研究为深入开展浅色黄姑鱼的生长发育相关基因的研究奠定了良好的基础。