基于miRNA微阵列探讨补阳还五汤对脑缺血大鼠神经血管单元的保护机制

目的 观察补阳还五汤对脑缺血大鼠微小RNA（miRNA）表达谱的影响，探讨其对脑缺血后神经血管单元（NVU）的保护机制。方法 将SD大鼠随机分为对照组、模型组、补阳还五汤组(5 g·kg-1)及丁苯酞组(54 mg·kg-1)，灌胃给药。除对照组外，其余各组采用大脑中动脉栓塞法复制脑缺血模型。灌胃给药7 d后，采用神经行为学评分评估神经功能损伤，HE染色评估病理损伤，免疫组化法检测脑组织中神经血管单元相关蛋白微管相关蛋白2（MAP2）、神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和血管性血友病因子（VWF）的表达，miRNA微阵列筛选差异表达的miRNAs，通过基因本体（GO）功能和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析差异miRNAs靶基因参与的主要生物学过程，实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法验证微阵列芯片结果。结果 与对照组比较，模型组大鼠神经行为学评分明显升高（P<0.01）；缺血侧神经元排列不规整，细胞间隙增宽，细胞核固缩；缺血侧脑组织中MAP2及VWF的表达降低（P<0.01）,GFAP表达上升（P<0.01）；共有82个差异表达的miRNAs（FC≥1.5且P<0.05）。与模型组比较，补阳还五汤组大鼠神经行为学评分降低（P<0.01）；缺血侧神经元排列相对规整，细胞间隙减小，核仁较清晰；缺血侧脑组织MAP2及VWF的表达上升（P<0.01）,GFAP表达下降（P<0.01）；并有9个差异表达的miRNAs（FC≥1.5且P<0.05）。生物信息学分析显示核心miRNAs可能主要通过IL-17信号通路、趋化因子信号通路及Hippo信号通路等发挥治疗作用。与对照组比较，qRT-PCR检测发现模型组中rno-miR-532-5p、rno-miR-338-3p及rno-miR-412-5p表达下调（P<0.01,P<0.05）,rno-miR-211-3p及rno-miR-494-3p表达上调（P<0.01,P<0.05）；与模型组比较，补阳还五汤组rno-miR-532-5p、rno-miR-338-3p及rno-miR-412-5p表达上调（P<0.01,P<0.05）,rno-miR-211-3p及rno-miR-494-3p表达下调（P<0.01），与微阵列芯片结果趋势一致。结论 补阳还五汤可能通过影响脑缺血大鼠的miRNA表达谱，保护神经血管单元，发挥抗脑缺血损伤的作用。