离子对反相高效液相色谱法同时检测水产品中6种ATP关联化合物

建立了水产品中6种ATP关联化合物的离子对反相高效液相色谱(IP-RPLC)检测方法,确定了缓冲液的最佳pH、流速和浓度,并对方法的准确度、精确度和检测限进行了测定。采用10%的高氯酸分离提取样品,用KOH溶液中和后进行HPLC分析。采用Waters 2695色谱系统,Thermo ODS-2 Hypersil(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,柱温为25℃;以10%甲醇,90%0.05 mol/L磷酸盐溶液为流动相,磷酸盐溶液含9 mmol/L四丁基氢氧化氨(TBA),并用1 mol/L的磷酸调pH至6.5,采用等度洗脱,流速为0.9 mL/min;检测波长为254 nm。结果表明:6种ATP关联化合物在13 min内完全分离;在2～400μg/mL范围内线性关系良好,相关系数在0.999 4～1.000 0之间;方法最低检测限(信噪比S/N=3)在0.1～0.4μg/mL之间;加标平均回收率为82.2%～110.0%,相对标准偏差为4.2%～9.5%。本方法可用于水产品中ATP、ADP、AMP、IMP、Hx和HxR等6种ATP关联化合物的同时测定和分析。