甘蓝下胚轴的高效再生和农杆菌介导B.t.基因转化甘蓝

分别对取材时间和培养基组成进行研究，建立了甘蓝下胚轴外植体的高效再生系统，当选取6～7d苗龄的下胚轴，将其置于MSB＋BA2．5mg／L＋ZT1mg／L＋IBA0．1mg／L的芽分化培养基中，并于培养基中附加AgNO37．5mg／L时，最高的芽分化频率，“夏光甘蓝”母本“103”可达81．67％，父本“60天早椰菜”可达78．56％。在此基础上，我们对影响转化频率的不同因素，即：抑制农杆菌生长的抗生素种类及其浓度、预培养的有无及感染时的浓度、下胚轴外植体与农杆菌的感染时间和共培养时间、筛选时抗生素的加入时间进行了探讨。共获得100余株卡那霉素抗性植株，全部移栽成活，生长良好。对转基因植株总DNA进行Southernblotting分析，证明nptⅡ基因已整合到甘蓝植株细胞基因组中。