TaqMan-MGB探针TaqMan-MGB探针实时荧光PCR检测金黄色葡萄球菌的研究

目的:建立Taq Man-MGB探针实时荧光PCR检测金黄色葡萄球菌的方法。方法:在对金黄色葡萄球菌的基因序列进行分析、对比基础上,设计一对特异性引物及探针;通过对Taq Man-MGB探针实时荧光PCR反应条件和反应体系的优化,实现对金黄色葡萄球菌的快速检测;用金黄色葡萄球菌标准株、金黄色葡萄球菌分离菌株及铜绿假单胞菌、黄色微球菌、乙型溶血性链球菌、柠檬酸杆菌、白念珠菌、粪链球菌、表面葡萄球菌、英诺克李斯特菌、李斯特菌等其它菌种验证方法的敏感性、特异性和稳定性。结果:本方法的特异性极强,检测标准金黄色葡萄球菌和41株金黄色葡萄球菌分离株的循环域值(CT值)在17.3～28.7之间,均为阳性,而铜绿假单胞菌、黄色微球菌、乙型溶血性链球菌、柠檬酸杆菌、白念珠菌、粪链球菌、表皮葡萄球菌、英诺克李斯特菌等52株非金黄色葡萄球菌菌株均为阴性,CT值均大于34或扩增曲线为一平滑直线;经6 h增菌后,金黄色葡萄球菌的最低检测限为5.8 cfu/ml;纯菌1个半小时就可以出结果;连续6次重复试验,变异系数<3%。结论:本研究建立的金黄色葡萄球菌Taq Man-MGB探针实时荧光PCR方法具有灵敏度高、特意性强、快速、操作方便等特点。