芫花总黄酮的抗炎机制研究

目的研究芫花总黄酮(TFDG)对脂多糖(LPS)协同干扰素γ(IFN-γ)诱导鼠RAW264.7巨噬细胞炎症模型中亚硝酸盐含量、诱导型合酶和细胞因子表达的影响,并从ERK/MAPK通路探讨其抗炎机制。方法细胞随机分为芫花总黄酮处理组,阳性药物组(I-NIL50μM)、炎症模型组和正常对照组;Griess反应测定TFDG25、50、100mg/L3个剂量和预刺激、同时加入、预处理3个处理时间及I-NIL对激活细胞上清液中亚硝酸盐的影响,并测定TFDG3个剂量及I-NIL对静息细胞上清液中亚硝酸盐产量的影响;MTT法测定TFDG3个剂量和I-NIL分别对激活细胞和静息细胞的细胞活力的影响;RT-PCR检测TFDG50、100mg/L预处理1h对激活细胞中诱导型合酶iNOS、COX-2、细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α基因表达的影响;Western blot检测TFDG50、100mg/L预处理1h对激活细胞中诱导型合酶iNOS、COX-2和p-ERK蛋白表达的影响。结果模型组中一氧化氮(NO)产物亚硝酸盐含量、诱导型合酶iNOS和COX-2基因和蛋白表达,细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α基因表达,ERK蛋白磷酸化水平均明显高于正常对照组(P<0.01,P<0.05),细胞活力显著下降(P<0.01);TFDG呈剂量和时间依赖性抑制激活细胞上清液中亚硝酸盐含量(P<0.01),提高炎症损伤的细胞活力(P<0.01);TFDG对静息细胞上清液中亚硝酸盐含量无影响,无细胞毒性且于100mg/L剂量促进细胞增殖(P<0.05)。阳性药物I-NIL于50μM剂量的抑制率为35.20%(P<0.01),提高炎症损伤后的细胞活力(P<0.01),但对静息细胞呈细胞毒性(P<0.05)。与模型组比较,芫花总黄酮下调iNOS基因和蛋白表达(P<0.01,P<0.05),抑制COX-2基因表达(P<0.01),对COX-2蛋白表达仅在高剂量100mg/L具抑制效果(P<0.01);下调细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α的基因表达(P<0.01),同时能抑制ERK蛋白的磷酸化水平(P<0.05)。结论芫花总黄酮抑制激活细胞中iNOS基因和蛋白的表达从而降低NO稳定产物亚硝酸盐的产量,抑制COX-2基因和蛋白的表达,同时抑制细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α的基因表达,部分机制为抑制ERK/MAPK信号通路中ERK蛋白磷酸化而达到多靶点抗炎效果。