微小病变患者尿蛋白对肾小管上皮细胞的损伤作用及其机制研究

目的 探讨尿蛋白对肾小管损伤的途径及加重肾脏病变的相关机制。方法 用硫酸铵沉淀法提取肾小球微小病变患者尿液中的总蛋白成分。体外培养人近端肾小管上皮细胞系HK-2细胞。用3H-TdR掺入法测定细胞增殖水平,Western blot方法检测细胞合成单核细胞趋化因子(MCP-1)及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)水平,RT、PCR检测细胞TGF-βmRNA表达,间接竞争ELISA检测细胞上清的纤连蛋白(FN)水平。结果(1)提取的尿蛋白主要成分为白蛋白、转铁蛋白和IgG,分别是84.5％、8.0％和1.2％。(2)0.2～10mg/ml浓度的尿蛋白能刺激HK-2细胞增殖,为对照组的3.33～8.59倍(P<0.01～0.001)。(3)在0.5～5mg/ml浓度的尿蛋白作用下,HK-2细胞分泌FN也明显高于对照组(P<0.001),5mg/ml时的作用最强,为对照组的(2.908±0.544)倍。(4)尿蛋白还诱导HK-2细胞合成MCP-1、α-SMA蛋白及上调表达TGF-β mRNA,当浓度为5～10 mg/ml时其作用最强。(5)TGF-β1中和抗体在浓度为1～2μg/ml时可部分阻断尿蛋白(5mg/ml)对HK-2细胞FN分泌和MCP-1蛋白合成的刺激作用。结论 人类微小病变来源的尿蛋白可刺激人近端肾小管上皮细胞增殖、分泌细胞外基质蛋白、合成炎症趋化因子,诱导肾小管细胞发生以α-SMA为标志物的表型转化。这一效应部分通过TGF-β1的介导作用。这可