枯草杆菌谷氨酰胺转胺酶的克隆及其在大肠杆菌中的融合表达

被引：6

作者：

周建

董亚芳

吴自荣

机构：

[1] 华东师范大学生命科学学院

[2] 华东师范大学生命科学学院上海

[3] 上海

来源：

中国生物工程杂志 | 2004年 / 08期

关键词：

谷氨酰胺转胺酶; 枯草杆菌; 融合表达;

D O I：

10.13523/j.cb.20040817

中图分类号：

Q55 [酶];

学科分类号：

071010 ; 081704 ;

摘要：

利用PCR技术 ,从枯草杆菌DB40 3染色体上扩增出谷氨酰胺转胺酶基因 ,将其克隆到大肠杆菌载体pET32a( + )中 ,成功构建谷氨酰胺转胺酶表达载体pET32 BTGase ,并转化大肠杆菌BL2 1 (DE3)。重组克隆在IPTG诱导下 ,表达出硫氧还蛋白谷氨酰胺转胺酶 (Trx BTGase)融合蛋白 ,表达量占细菌总蛋白量的 2 6%。利用金属螯合层析纯化菌体裂解上清中表达的融合蛋白 ,纯度超过 80 %,再通过分子筛层析进一步纯化得到融合蛋白纯品。酶活性分析表明表达的Trx BTGase融合蛋白具有交联蛋白的活性 ,并发现Trx BTGase融合蛋白和经凝血酶酶切后得到的BTGase单体都能催化牛血清白蛋白的聚合反应

引用

页码：77 / 81

页数：5

共 4 条

[1] 微生物谷氨酰胺转胺酶高产菌株的诱变选育 [J].

王璋 ;

王灼维 ;

不详 .

食品科学 , 2003, (05) :62-67

[2] 微生物转谷氨酰胺酶生产菌的“神舟四号”飞船搭载育种研究——搭载前地面育种试验(I) [J].

王璋 ;

王灼维 ;

袁辉 ;

王洁 ;

刘新征 .

食品与发酵工业, 2003, (01) :6-12

[3]

Microbial transglutaminase—a review of its production and application in food processing[J] . Y. Zhu,A. Rinzema,J. Tramper,J. Bol. &nbspApplied Microbiology and Biotechnology . 1995 (3)

[4] 土壤分离转谷氨酰胺酶生产菌株 [J].

王灼维 ;

王璋 .

食品与发酵工业, 2003, (04) :5-10

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