鸡白细胞介素-18基因的原核表达及多克隆抗血清的制备附视频

被引：12

作者：

刘胜旺

潘蔚绮

孔宪刚

李广兴

夏春

机构：

[1] 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

[2] 东北农业大学动物医学院

[3] 中国农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨

[4] 黑龙江哈尔滨

[5] 北京

来源：

中国兽医学报 | 2003年 / 05期

关键词：

原核表达; 鸡IL-18融合蛋白; 纯化; 抗血清;

D O I：

10.16303/j.cnki.1005-4545.2003.05.004

中图分类号：

Q785 [转化及克隆];

学科分类号：

071007 ; 0836 ; 090102 ;

摘要：

将编码鸡白细胞介素 - 18(interleukin- 18,IL- 18)成熟蛋白的基因亚克隆至原核表达载体 p PROEXTMHT中 ,构建重组质粒并进行确证性序列测定。然后将重组质粒转化大肠杆菌 DH5α并用 IPTG于 37℃诱导培养。表达的融合蛋白主要以包涵体形式存在 ,目的蛋白表达量占菌体蛋白的 30 %。 SDS- PAGE和 Western blot分析显示 ,表达的鸡 IL-18融合蛋白相对分子质量约为 2 30 0 0。包涵体被 6 mol/ L 盐酸胍裂解后 ,通过镍离子亲和树脂进行了纯化。用所获得的重组鸡 IL- 18融合蛋白及其纯化产物经 3次肌肉注射豚鼠 ,制备豚鼠抗鸡 IL- 18多克隆抗血清 ,并用琼脂扩散试验多克隆抗血清进行了证明。本试验成功的原核表达、纯化了鸡 IL- 18融合蛋白 ,并制备了抗鸡 IL- 18多克隆抗血清 ,为下一阶段关于鸡 IL - 18重组蛋白生物学特性及其应用的研究打下了坚实的基础

引用

页码：427 / 430

页数：4

共 3 条

[1] 编码鸡IL-18成熟蛋白基因的分子克隆与序列测定 [J].

潘蔚绮 ;

刘胜旺 ;

孔宪刚 ;

李广兴 ;

夏春 .

中国预防兽医学报, 2003, (02) :35-38

[2]

分子克隆实验指南[M]. 科学出版社[美]萨姆布鲁克（Sambrook,J·）等著, 1992

[3]

Interleukin 18, a Cytokine Which Resembles IL-1 Structurally and IL-12 Functionally but Exerts Its Effect Independently of Both[J] . Keizo Kohno,Masashi Kurimoto.Clinical Immunology and Immunopathology . 1998 (1)

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