副溶血性弧菌的添加内标的PCR检测方法的建立及评价

目的:建立并评价检测副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)的添加内标(internal control,IC)的PCR方法。方法:利用生物信息学方法,分析副溶血性弧菌中特异基因toxR和tlh,设计引物,toxR中900 bp的特异序列为目的片段;tlh中522bp的特异序列为添加片段,利用复合引物法构建IC,建立PCR检测体系。结果:本研究成功构建添加IC的PCR检测体系,利用该体系对副溶血性弧菌和非副溶血性弧菌进行检查,结果显示,以副溶血性弧菌为模板的PCR反应可扩增到900 bp和560 bp的特异片段,而以非副溶血性弧菌为模板的反应扩增到一条560 bp的IC片段。该方法对DNA灵敏度的检测极限是0.5 pg/μl,此时IC的最佳添加浓度是0.5 fg/μl。并对多份水产品的检测结果也证实其能起到很好的指示假阴性作用。结论:添加内标的PCR方法能够准确检测水产品中副溶血性弧菌,排除假阴性干扰。