以蛋白质磷酸酶CDC25A/B为靶标的抗癌药筛选体系的构建附视频

被引：1

作者：

李常虹 ^{[1
]}

张丽君 ^{[2
]}

赵翔 ^{[1
]}

张页 ^{[1
]}

机构：

[1] 北京大学基础医学院

[2] 北京大学生命科学学院

来源：

山东医药 | 2011年 / 28期

关键词：

靶向抗癌药; CDC25磷酸酶; GST融合蛋白; 高通量筛选; 对硝基苯磷酸盐;

D O I：

暂无

中图分类号：

R979.1 [抗肿瘤、抗癌药物];

学科分类号：

1007 ;

摘要：

目的通过克隆和表达人蛋白质磷酸酶CDC25A/B融合蛋白,探讨构建高通量靶向抗癌药筛选体系的途径。方法采用RT-PCR技术克隆人CDC25A/B催化区结构域cDNA序列,构建pGEX-4T-1-CDC25A/B原核表达质粒,表达和纯化携带还原型谷胱甘肽(GSH)标签的融合蛋白。以对硝基苯基磷酸盐(pNPP)为底物,在96孔板上建立分别以GST-CDC25A/B为靶标的筛选体系,应用维生素K3(VK3)进行验证性抑制剂筛选。结果成功表达和纯化了GST-CDC25A/B融合蛋白,建立了相应的高通量磷酸酶抑制剂筛选体系。在相同反应条件下,GST-CDC25B对pNPP的水解活性是GST-CDC25A的6倍。VK3对CDC25A/B的半数抑制浓度(IC50)分别为0.8和1.8μg/ml。结论通过表达和纯化CDC25A/B催化区结构域与GST的融合蛋白,可以高效率的建立靶酶抑制剂高通量筛选体系,为进一步研发VK3衍生物类新型靶向抗癌药奠定了基础。

引用

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页数：4

共 4 条

[1] 恶性肿瘤的分子靶向治疗 [J].