短发卡RNA特异性抑制Survivin基因在U251细胞中的表达

被引：7

作者：

甄海宁 ^{[1
]}

章翔 ^{[1
]}

杨彤涛 ^{[2
]}

吴元明 ^{[3
]}

白文涛 ^{[3
]}

付洛安 ^{[1
]}

章薇 ^{[1
]}

高大宽 ^{[1
]}

胡世颉 ^{[1
]}

王西玲 ^{[1
]}

机构：

[1] 第四军医大学西京医院全军神经外科研究所

[2] 第四军医大学唐都医院全军骨科中心

[3] 第四军医大学基础部生物化学教研室

来源：

中华神经外科疾病研究杂志 | 2005年 / 06期

关键词：

RNA干涉; 短发卡RNA; Survivin; 胶质瘤;

D O I：

暂无

中图分类号：

R739.4 [神经系肿瘤];

学科分类号：

100214 ;

摘要：

目的构建针对人Survivin基因的特异性短发卡RNA(shRNA)真核表达载体,并观察其在人脑胶质母细胞瘤U251细胞中对Survivin基因表达的抑制作用。方法根据SurvivincDNA编码序列,设计并合成针对Survivin基因的特异性RNA干涉片断,将其克隆入pWH1质粒载体,构建Survivin基因shRNA真核表达载体pWH1SR。通过脂质体介导将pWH1SR载体和空载体pWH1分别转染入U251细胞,经G418筛选,建立稳定转染的细胞系U251SR和U251P。采用RTPCR、Westernblot和免疫组化方法检测SurvivinmRNA和蛋白在U251、U251P和U251SR细胞中的表达水平。结果成功构建了Survivin基因shRNA真核表达载体pWH1SR,经酶切鉴定证实克隆正确。获得了稳定转染pWH1SR载体和空载体pWH1的细胞系U251SR和U251P。U251SR细胞SurvivinmRNA和蛋白表达均受到明显抑制,抑制率分别达87%和91%;U251P细胞Survivin基因表达水平无明显变化。结论特异性shRNA能够明显抑制Survivin基因在U251细胞中的表达,这为进一步研究Survivin在U251细胞中的生物学功能和作用机制奠定了实验基础。

引用

页码：496 / 500

页数：5

共 4 条

[1] Survivin及其剪接变异体在脑胶质瘤中的表达 [J].