人卵巢癌cDNA表达文库的构建

被引：6

作者：

张笑人

葛海良

王颖

周光炎

蔡晓敏

谢毅

柴建华

机构：

[1] 上海第二医科大学上海市免疫学研究所

[2] 上海第二医科大学附属瑞金医院

[3] 复旦大学遗传学研究所

[4] 复旦大学遗传学研究所上海

[5] 上海

来源：

中国肿瘤生物治疗杂志 | 1998年 / 04期

关键词：

卵巢癌; cDNA表达文库; PCR;

D O I：

暂无

中图分类号：

R737.31 [卵巢肿瘤];

学科分类号：

100214 ;

摘要：

以polyA+ mRNA提取试剂盒从卵巢癌组织中获得高质量的polyA+ mRNA,并以此合成第1、2链cDNA.cDNA两端补平后加EcoR Ⅰ接头,Xbo酶切,通过分级分离去除<400bP的片段.取100ng cDNA与噬菌体表达载体Uni-ZAP XR连接,体外进行噬菌体DNA包装,并立即进行文库的滴定和扩增,获得卵巢癌cDNA表达文库.该文库原始重组子为10～6独立克隆;重组率>99%;并以引物PUCⅠ、PUCⅡ扩增插入片段,平均大小约为1.1kb.证实此cDNA表达文库合格.以PCR从此cDNA表达文库中筛选HLA-DPB和β-actin基因,获得成功.

引用

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