表达H3N2亚型猪流感病毒HA基因重组伪狂犬病病毒的构建

被引:18
作者
周国辉
倪健强
田志军
仇华吉
李海燕
童光志
机构
[1] 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室
[2] 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室 哈尔滨
[3] 新疆农业大学动物医学院
[4] 乌鲁木齐
[5] 哈尔滨
关键词
伪狂犬病病毒; 猪流感病毒; 重组病毒; HA;
D O I
暂无
中图分类号
S858.28 [猪];
学科分类号
090504 [特种经济动物饲养];
摘要
将SV40启动子控制下的LacZ基因表达盒和CMV启动子控制下的H3N2亚型猪流感病毒(SIV H3N2)的HA基因插入到伪狂犬病病毒(PRV)通用转移载体pBdTK-Uni中,获得转移载体pLTK-HA。将该载体与PRV Bartha-K61株基因组DNA通过脂质体法共转染Vero细胞,经过10代蓝斑筛选、纯化和PCR鉴定获得了一株插入SIV HA基因的重组伪狂犬病病毒,命名为rPRV-HA。Western blotting和间接免疫荧光试验证实HA基因在重组病毒感染的细胞中获得了表达。用不同的细胞(PK-15I、BRS-2、Vero和鸡胚成纤维细胞)对该重组病毒与亲本病毒的增殖滴度和致细胞病变进行比较,未见显著差异,对第30代重组病毒的HA基因进行序列分析,表明该重组病毒遗传性状稳定。
引用
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