Notch1在BMP9诱导iMEF细胞成骨分化中的作用

被引：8

作者：

杨伦韵

张晓艳

廉静

曹俊杰

罗进勇

唐敏

机构：

[1] 重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室

来源：

第三军医大学学报 | 2015年 / 37卷 / 01期

关键词：

Notch1; 骨髓间充质干细胞; 永生化小鼠胚胎成纤维细胞; 骨形态发生蛋白9;

D O I：

10.16016/j.1000-5404.201407116

中图分类号：

R329.2 [人体细胞学];

学科分类号：

100107 [人体解剖与组织胚胎学（人体解剖学、组织与胚胎学）];

摘要：

目的研究Notch信号中Notch1受体在骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic proteins 9,BMP9)诱导的永生化小鼠胚胎成纤维细胞(immortalized mouse embryonic fibroblasts,i MEF)成骨分化中的作用。方法利用Notch1受体显性负性突变体(dominant negative mutant,dn Notch1)处理i MEF细胞,首先分别采用细胞化学染色、活性测定和RT-PCR了解Notch1对早期成骨指标碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)和晚期成骨指标骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、骨钙素(osteocalcin,OCN)的影响;其次用Western blot、荧光素酶和RT-PCR检测Notch1对BMP9经典信号通路中Smad1/5/8磷酸化和Smad结合元件(smad-binding element,SBE)活性影响;最后用结晶紫染色和流式细胞仪分析其对细胞增殖、周期及凋亡的影响。结果与对照组相比,dn Notch1处理i MEF第3、5、7天后,ALP活性均降低(P<0.05),并呈剂量依赖性,11 d时OPN和OCN表达量也下调(P<0.05);BMP9经典通路中Smad1/5/8蛋白量没有明显变化,而p-Smad1/5/8蛋白及SBE活性受到了抑制(P<0.05);结晶紫染色及流式细胞仪分析结果显示dn Notch1能够抑制BMP9诱导的i MEF早期细胞增殖,但对细胞凋亡无影响。结论 dn Notch1竞争抑制Notch1信号,使BMP9诱导i MEF的成骨分化能力显著下降,其可能通过抑制BMP信号通路的活化和i MEF早期增殖两方面来实现。

引用

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共 6 条

[1]

IFN- γ -Secreting-Mesenchymal Stem Cells Exert an Antitumor Effect In Vivo via the TRAIL Pathway.[J].Xinyuan Yang;Jingchun Du;Xia Xu;Chun Xu;Wu Song;Yi Zhang.Journal of Immunology Research.2014,

[2]

Silk proteins stimulate osteoblast differentiation by suppressing the Notch signaling pathway in mesenchymal stem cells.[J].So-Ra Jung;No-Joon Song;Dong Kwon Yang;Yong-Jun Cho;Byung-Joon Kim;Joung-Woo Hong;Ui Jeong Yun;Dong-Gyu Jo;Young Min Lee;Soo Young Choi;Kye Won Park.Nutrition Research.2012,

[3]

Inhibition of Notch1 Signaling by Runx2 During Osteoblast Differentiation [J].