可溶性VEGF受体Flt-1的基因克隆及其活性产物在原核中的表达

被引:6
作者
安平
董志伟
寿成超
机构
[1] 北京医科大学临床肿瘤学院!北京市肿瘤防治研究所!北京,中国医学科学院肿瘤研究所!北京,北京医科大学临床肿瘤学院!北京市肿瘤防治研究所!北京
基金
国家杰出青年科学基金;
关键词
血管内皮细胞生长因子; 可溶性受体; Flt-1; 原核表达; 结合活性;
D O I
10.13865/j.cnki.cjbmb.2000.01.013
中图分类号
Q78 [基因工程(遗传工程)];
学科分类号
071007 ; 0836 ; 090102 ;
摘要
可溶性血管内皮细胞生长因子受体 ( Flt- 1 )具有受体拮抗剂作用 ,可竞争结合血管内皮细胞生长因子 ,( VEGF)并与其膜表面受体 Flt- 1及 KDR形成异源二聚体 ,最终阻断 VEGF的生物学活性 .利用 RT- PCR技术从人脐静脉内皮细胞扩增出 Flt- 1胞外 ~ 区 c DNA片段 ,通过基因重组将该片段克隆于谷胱甘肽转移酶 ( GST)融合蛋白表达载体 PGEX2 -T中 ,连接产物转化大肠杆菌XL1 - blue,经 IPTG诱导可获大量稳定表达的 Flt- 1 - GST融合蛋白 .该表达产物经变性复性处理后 ,可特异性结合 12 5 - VEGF.大量具有活性的可溶性 Flt- 1的获得有助于新的抗肿瘤血管形成方法的探索 .
引用
收藏
页码:62 / 66
页数:5
相关论文
共 9 条
[1]  
Identification of a natural soluble form of the vascular endothelial growth factor receptor, Flt-1, and its heterodimerization with KDR. Kendall RL,Wang G,Thomas KA. Biochemical and Biophysical Research Communications . 1996
[2]  
Different signal transduction properties of KDR and Flt -1, two receptros for vascular endothelial growth factor. Waltenberger J,Claesson-Weleh L,Siegbahn A. Journal of Biological Chemistry . 1994
[3]  
Crystal structure at 1. 7A resolution of VEGF in complex with domain 2 of the flt -1 receptor. Wiesmann C,Fuh G,Christinger H W. Cell . 1997
[4]  
The second immunoglobulinlike domain of the VEGF tyrosine kinase receptor Flt -1 determines ligand binding and may initiate a signal transduction cascade. Davis-Smyth T,Chen H,Park J. EMBO Journal . 1996
[5]   人TIMP-3 cDNA的克隆、表达及其抗血管生成作用 [J].
孙建新 ;
张传溪 ;
陈珍珍 ;
吴祥甫 .
生物化学与生物物理学报, 1998, (03) :6-10
[6]  
Differential binding characteristics and cellular inhibition by soluble VEGF receptor 1 and 2. Roeckl W,Hecht D,Sztajer H. Experimental Cell Research . 1998
[7]  
Paracrine expression of a native soluble vascular endothelial growth factor receptor inhibits tumor growth, metastasis, and mortality rate. Goldman C K,Kendall R L,Cabreara G. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America . 1998
[8]  
Role of the Flt -1 receptor tyrosine kinase in regulating the assembly of vascular endothelium. Feng G H,Rossant J,Gertsenstein M. Nature . 1995
[9]  
Failure of blood island and vasculogenesis in Flk-1 deficient mice. Shalaby F,Rossant J,Yamaguchi T P. Nature . 1995