微小RNA-34a基因沉默对软骨细胞凋亡的影响

被引：9

作者：

周新华 ^{[1
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王敏 ^{[2
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刘超 ^{[2
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张瑗 ^{[2
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罗嘉全 ^{[3
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邹学农 ^{[3
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机构：

[1] 北京大学第四临床积水潭医院矫形骨科

[2] 第三军医医科大学附属新桥医院骨科

[3] 中山大学附属第一医院脊柱外科

来源：

中华实验外科杂志 | 2014年 / 31卷 / 07期

关键词：

微小RNA-34a; LNA-miRNA-34a; 骨关节炎; 凋亡;

D O I：

暂无

中图分类号：

R329.2 [人体细胞学];

学科分类号：

100107 [人体解剖与组织胚胎学（人体解剖学、组织与胚胎学）];

摘要：

目的观察早期骨关节炎(OA)软骨细胞中微小RNA(miRNA)-34a以及凋亡细胞的变化,并应用miRNA-34a的抑制剂锁核苷酸(LNA-miRNA-34a)观察miRNA-34a沉默对软骨细胞miRNA-34a的表达和凋亡的影响。方法建立6周兔早期OA模型,并分别获得正常(A组)、3周(B组)和6周(C组)软骨细胞,应用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和免疫细胞化学等技术分析软骨细胞中miRNA-34a以及Ⅱ型胶原(Col2a1)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达及其规律,同时采用原位末端转移酶标记染色法(TUNEL)观察细胞凋亡。转染LNA-miRNA-34a后再用同样方法获得上述各项结果并进行比较分析。结果 B组和C组软骨细胞中miRNA-34a的表达水平分别是A组的2.70倍和3.05倍;在转染LNA-miRNA-34a后,B组和C组miRNA-34a的表达降低了2.07倍和3.03倍。转染前,B组和C组iNOS的表达与A组比较分别增加了13.50倍和16.70倍,转染后B组和C组中iNOS表达与转染前比较分别降低了41.00%和37.00%;转染前B组和C组Col2a1的表达水平和A组比较,分别降低了46.80%和30.00%;转染后,Col2a1的表达和转染前比较,B组增加了2.00倍,而C组增加2.95倍;免疫组织化学染色结果显示,转染后B组和C组Col2a1阳性细胞增多,阳性染色增强,甲苯胺蓝和TUNEL染色显示凋亡细胞数显著减少。结论早期OA软骨细胞miRNA-34a表达增加,LNA-miRNA-34a沉默miRNA-34a基因可以显著减少早期OA软骨细胞的凋亡。

引用