MAPK通路在红托竹荪多糖诱导人胃癌MKN-45细胞凋亡中的作用机制研究

目的：研究红托竹荪多糖对人胃癌MKN-45细胞增殖与凋亡的影响，并基于丝裂原激活的蛋白激酶（MAPK）信号通路探讨其可能的作用机制。方法：体外培养MKN-45细胞，分为对照组，红托竹荪多糖低、中及高剂量组，采用终浓度分别为0、4、6及8 mg/mL的红托竹荪多糖作用于细胞48 h后，采用细胞计数法检测红托竹荪多糖对人胃癌MKN-45细胞增殖的影响；采用倒置显微镜观察不同浓度的红托竹荪多糖作用于人胃癌MKN-45细胞48 h后细胞形态学的变化。设立实验组的红托竹荪多糖终浓度为8 mg/mL,采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染色流式细胞技术检测细胞的凋亡率；采用流式细胞术检测细胞周期分布；采用蛋白质印迹法检测红托竹荪多糖作用胃癌细胞后p38蛋白激酶（p38）、磷酸化p38蛋白激酶（p-p38）、细胞外调节蛋白激酶（ERK）、磷酸化细胞外调节蛋白激酶（p-ERK）、C-JUN氨基末端激酶（JNK）、磷酸化C-JUN氨基末端激酶（p-JNK）、B淋巴细胞瘤-2蛋白（Bcl-2）和活化的半胱氨酸蛋白酶-3 （cleaved Caspase-3）蛋白的表达，即与3-磷酸甘油醛脱氢酶（GADPH）灰度值比值。结果：作用48 h后，不同浓度的红托竹荪多糖（4、6及8 mg/mL）对人胃癌MKN-45细胞增殖的抑制率分别为（8.27±5.99）%、（21.83±5.77）%和（56.95±5.21）%;在检测的浓度范围下，随着浓度的升高，红托竹荪多糖对MKN-45细胞增殖的抑制率逐渐升高。倒置显微镜下显示，经8 mg/mL的红托竹荪多糖作用48 h后，MKN-45细胞密度与对照组相比明显减少。流式细胞术检测结果显示，与对照组相比，实验组人胃癌MKN-45细胞凋亡率显著升高（P<0.05）;细胞周期结果显示，实验组G1期细胞比例明显减少（P<0.05）,G2期细胞比例明显增多（P<0.05）,S期细胞比例明显减少（P<0.05）;蛋白质印迹法结果显示，与对照组相比，实验组MKN-45细胞中cleaved Caspase-3的表达有升高趋势（P<0.05）,Bcl-2的表达有降低趋势（P<0.05）,p-P38/P38比值、p-ERK/ERK比值与p-JNK/JNK比值均低于对照组（P<0.05）,上述差异均有统计学意义。结论：红托竹荪多糖在体外能抑制人胃癌MKN-45细胞增殖并诱导细胞凋亡，使肿瘤细胞阻滞在G2/M期，其作用可能通过调控MAPK信号通路实现。