双价抗虫基因植物表达载体的构建及其在烟草中的表达

利用人工合成及密码子优化后的雪花莲凝集素 （ＧＮＡ） 基因， 与人工合成的ＧＦＭ ｃｒｙＩＡ构建了双价基因中间载体。双价基因进一步亚克隆到植物表达载体ｐＢＩ１２１．１上， 获得了带有两个抗虫基因ｃｒｙＩＡ及ＧＮＡ基因的高效植物表达载体ｐＧＷ４ＢＡＩ， 在载体中两基因的５′端、３′端各加入与在植物中能增强基因转录和翻译有关的调控元件。通过根癌农杆菌介导叶盘法转化烟草Ｋ３２６， 获得２８株卡那霉素抗性植株， 随机抽取１７株经ＰＣＲ及进一步Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 印迹检测，证实了双价抗虫基因在烟草基因组中的整合。转基因烟草杀棉铃虫试验表明４０％ 的转基因烟草植株对棉铃虫具有高抗性； 抑制蚜虫试验表明有效降低了蚜虫繁殖率， 转基因植株抑制蚜口密度为３０％ ～８５％ 不等， 并且获得了数株兼抗棉铃虫及蚜虫效果均良好的转基因烟草植株。