幽门螺杆菌UreB-NAP-HpaA三价DNA疫苗的构建及免疫原性初步研究

目的:构建幽门螺杆菌(Hp)尿素酶亚单位B(UreB)、中性粒细胞激活蛋白(NAP)及黏附素A(HpaA)三价重组DNA疫苗并研究其抗原性,为Hp疫苗的开发奠定基础。方法:PCR扩增UreB、NAP、HpaA全长序列,分别克隆入pMD18T载体,测序并鉴定方向后依次连接,构建融合基因UNH,然后将其亚克隆入真核表达载体pIRES,以此转染COS7细胞,Western印迹检测表达蛋白的抗原性。结果:PCR分别获得约1707、432和750bp产物,与GenBank中相关序列具有高度同源性,三者融合后获得一约2901bp目的基因。重组质粒pIRES-UNH转染COS7细胞后表达相对分子质量约107000的蛋白质,Western印迹显示该重组蛋白可为UreB、NAP、HpaA抗血清特异识别,具有良好的抗原性。结论:成功构建了具有良好免疫原性的UreB-NAP-HpaA三价重组DNA疫苗,为进一步探讨其免疫保护性及Hp疫苗的研制奠定了基础。